苏云金杆菌辅助蛋白P20对杀虫晶体蛋白Cry1Ab表达的影响 |
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引用本文: | 汤慕瑾,袁美妗,陈建武,师永霞,曾少灵,余健秀,庞义.苏云金杆菌辅助蛋白P20对杀虫晶体蛋白Cry1Ab表达的影响[J].生物工程学报,2003,19(5). |
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作者姓名: | 汤慕瑾 袁美妗 陈建武 师永霞 曾少灵 余健秀 庞义 |
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作者单位: | 中山大学生物防治国家重点实验室,广州,510275 |
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基金项目: | 国家高技术研究发展计划(863计划),广东省自然科学基金 |
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摘 要: | 苏云金杆菌(Bacillus thuringiensis, 简称Bt)杀虫晶体蛋白Cry1Ab因其C半端缺少了一段含4个半胱氨酸的氨基酸序列而导致蛋白的不稳定,报道苏云金杆菌辅助蛋白P20帮助Cry1Ab蛋白的表达及晶体的形成。利用穿梭载体pHT3101构建3个表达质粒,即pT1B、pP1B和pDP1B,3个质粒都含有cry1Ab基因,不同在于pT1B没有p20基因,pP1B含有p20全基因,而pDP1B不仅含有p20全基因,且在p20基因前插入cry1A?启动子。分别将这3个表达质粒经电转化到苏云金杆菌晶体缺陷型菌株CryB中,获得转化菌株T1B、P1B和DP1B。Western blot表明cry1Ab基因在这3株菌中均表达了130 kD的蛋白,部分降解为大约60 kD的蛋白。蛋白定量分析显示,3株菌130 kD蛋白量的比为1∶1.4∶1.5,降解后的60 kD蛋白量的 比为1∶1.1∶1.6,Cry1Ab蛋白总量的比为1∶1∶2∶1.6。镜检发现,Cry1Ab在3株菌中都形成典型的菱形晶体,其晶体大小为T1B Helicoverpa armigera)均具有明显的杀虫活性,三者的LC50差异不显著。研究表明,P20对cry1Ab基因的表达和晶体形成均有帮助,P20表达量的多少可能是导致Cry1Ab蛋白最终产量有所不同的因素。
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关 键 词: | 苏云金杆菌,p20 基因,cry1Ab基因,表达 |
Bacillus thuringiensis Helper Protein P20 Affects the Formation of Cry1Ab |
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