定点突变改善红色荧光指示蛋白玉米尿卟啉原Ⅲ甲基化酶的水溶性研究 |
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引用本文: | 潘海韵,程郢,朱苏文,范军.定点突变改善红色荧光指示蛋白玉米尿卟啉原Ⅲ甲基化酶的水溶性研究[J].生物工程学报,2007,23(2):206-210. |
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作者姓名: | 潘海韵 程郢 朱苏文 范军 |
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作者单位: | 安徽农业大学生命科学学院,合肥,230036 |
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基金项目: | 安徽省科学技术厅资助项目 |
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摘 要: | 尿卟啉原Ⅲ甲基化酶是一种新型的红色荧光指示蛋白,但是,在大肠杆菌重组表达的SUMT水溶性相对较低,限制了它的应用范围,而且对于结合在蛋白的色素组分尚不清楚。利用定点突变产生玉米尿卟啉原Ⅲ甲基化酶L88R/L89G双突变体和L166A突变体,两种突变体分别在大肠杆菌中重组表达,Ni-NTA一步纯化。紫外可见光谱扫描和质谱分析确定从纯化的L88R/L89G双突变体蛋白分离的色素组分。L88R/L89G双突变体在大肠杆菌细胞内有酶活,而L166A突变体胞内酶活丧失。结合蛋白的主要组分为三甲基化咕啉。纯化的双突变体蛋白水溶性增加,为提高它作为荧光指示蛋白检测外源融合蛋白的水溶性打下基础。
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关 键 词: | 尿卟啉原Ⅲ甲基化酶 玉米 定点突变 三甲基咕啉 |
文章编号: | 1000-3061(2007)02-0206-05 |
修稿时间: | 09 15 2006 12:00AM |
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