| 一种经microRNA敲低PD-1的新型慢病毒载体在CAR-T细胞中的应用 |
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| 引用本文： | 陈辉,金熙,张校曼,高基民.一种经microRNA敲低PD-1的新型慢病毒载体在CAR-T细胞中的应用[J].生物工程学报,2020,36(7):1395-1404. |
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| 作者姓名： | 陈辉 金熙 张校曼 高基民 |
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| 作者单位： | 1 温州医科大学 检验医学院 生命科学学院，浙江 温州 325035;1 温州医科大学 检验医学院 生命科学学院，浙江 温州 325035;2 温州医科大学 浙江启新生物技术有限公司，浙江 温州 325035 |
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| 基金项目： | 国家卫生健康委员会科学研究基金-浙江省医药卫生重大科技计划 (No. WKJ-ZJ-1928)，温州市重大科技专项 (Nos. ZS2017014，ZS2018ZY001) 资助。 |
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| 摘 要： | 本研究将microRNA插入EF1α启动子的内含子中,构建携带沉默PD-1基因的miRNA的新型慢病毒载体,并将其应用于CAR-T细胞。通过流式细胞术检测慢病毒载体转导效率和PD-1沉默效率;Westernblotting检测PD-1蛋白表达差异;荧光定量PCR检测microRNA相对表达情况;荧光素酶生物发光法和流式细胞术检测CAR-T细胞的能力。结果显示与U6转录microRNA的载体相比较,将microRNA插入到EF1-α内含子中的病毒载体转导效率更显著,对PD-1的敲低效率均达90%以上,且Westernblotting结果验证了PD-1的敲低效果。另外通过荧光定量PCR,可显示出转导该新型慢病毒载体的Jurkat细胞内microRNA的相对表达量。荧光素酶生物发光法证实了CAR-T细胞针对靶细胞的特异杀伤性,流式细胞术结果表明沉默PD-1的CAR-T细胞相较于正常CAR-T细胞显示出更强的特异性杀伤能力。本研究成功构建了经microRNA敲低PD-1的新型慢病毒载体并验证了其转导效率的优越性,以及基于此载体表达的microRNA可高效地沉默PD-1;且应用此载体的CAR-T细胞能发挥更强的杀伤活性,从而为后续该CAR-T细胞治疗表达PD-L1的肿瘤奠定基础。
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| 关 键 词： | 程序性死亡受体1，microRNA，新型慢病毒载体，嵌合抗原受体T细胞 |
| 收稿时间： | 2019/4/9 0:00:00 |
Construction of a novel lentiviral vector knocking down PD-1 via microRNA and its application in CAR-T cells |
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| Hui Chen,Xi Jin,Xiaoman Zhang,Jimin Gao.Construction of a novel lentiviral vector knocking down PD-1 via microRNA and its application in CAR-T cells[J].Chinese Journal of Biotechnology,2020,36(7):1395-1404. |
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| Authors: | Hui Chen Xi Jin Xiaoman Zhang Jimin Gao |
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| Institution: | 1 School of Laboratory Medicine and Life Science, Wenzhou Medical University, Wenzhou 325035, Zhejiang, China; 1 School of Laboratory Medicine and Life Science, Wenzhou Medical University, Wenzhou 325035, Zhejiang, China;2 Zhejiang Qixin Biotech, Wenzhou Medical University, Wenzhou 325035, Zhejiang, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | programmed cell death protein 1 microRNA novel lentiviral vector CAR-T cells |
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