| 无标记转Fat-1基因真核表达载体的构建及转基因绵羊细胞系的建立 |
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| 引用本文： | 阿力玛,朱和平,王瑞瑶,闫涛,苏小虎,李璐,王丙萍,那顺温都乐,齐贵春,周欢敏.无标记转Fat-1基因真核表达载体的构建及转基因绵羊细胞系的建立[J].生物工程学报,2016,32(2):212-221. |
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| 作者姓名： | 阿力玛 朱和平 王瑞瑶 闫涛 苏小虎 李璐 王丙萍 那顺温都乐 齐贵春 周欢敏 |
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| 作者单位： | 内蒙古农业大学生命科学学院 内蒙古自治区生物制造重点实验室，内蒙古 呼和浩特 010018,内蒙古农业大学生命科学学院 内蒙古自治区生物制造重点实验室，内蒙古 呼和浩特 010018,内蒙古农业大学生命科学学院 内蒙古自治区生物制造重点实验室，内蒙古 呼和浩特 010018,内蒙古农业大学生命科学学院 内蒙古自治区生物制造重点实验室，内蒙古 呼和浩特 010018,内蒙古农业大学生命科学学院 内蒙古自治区生物制造重点实验室，内蒙古 呼和浩特 010018,内蒙古农业大学生命科学学院 内蒙古自治区生物制造重点实验室，内蒙古 呼和浩特 010018,内蒙古农业大学生命科学学院 内蒙古自治区生物制造重点实验室，内蒙古 呼和浩特 010018,内蒙古农业大学生命科学学院 内蒙古自治区生物制造重点实验室，内蒙古 呼和浩特 010018,内蒙古农业大学生命科学学院 内蒙古自治区生物制造重点实验室，内蒙古 呼和浩特 010018,内蒙古农业大学生命科学学院 内蒙古自治区生物制造重点实验室，内蒙古 呼和浩特 010018 |
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| 基金项目： | 内蒙古生物高科技项目 (No. 20030301) 资助。 |
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| 摘 要： | 为了建立无筛选标记基因的转Fat-1基因绵羊细胞系,本研究将PCR克隆得到的Fat-1基因,合成的attB、Loxp序列并克隆入pN1-EGFP框架载体,得到可删除筛选标记基因的pEGFP-N1-Fat-1真核表达载体。体外转录合成phiC31整合酶mRNA并与线性化的pEGFP-N1-Fat-1载体共转染绵羊胎儿皮肤成纤维细胞,G418筛选得到表达绿色荧光的单克隆,再利用pET-28a-His-NLS-TAT-Cre质粒诱导Cre重组蛋白表达,将纯化后的Cre穿膜肽转导表达绿色荧光的单克隆细胞,将荧光淬灭的细胞系扩繁,提取基因组DNA,进行PCR及测序鉴定,得到无标记转Fat-1基因绵羊胎儿皮肤成纤维细胞系,为生产无筛选标记基因的转基因绵羊奠定基础。
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| 关 键 词： | Fat-1基因，真核表达载体，筛选标记，phiC31整合酶 |
| 收稿时间： | 2015/3/27 0:00:00 |
Construction of Fat-1 eukaryotic expression vector of excision markers and the establishment of transgenic sheep cell lines |
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| Lima A,Heping Zhu,Ruiyao Wang,Tao Yan,Xiaohu Su,Lu Li,Bingping Wang,Shunwendoule N,Guichun Qi and Huanmin Zhou.Construction of Fat-1 eukaryotic expression vector of excision markers and the establishment of transgenic sheep cell lines[J].Chinese Journal of Biotechnology,2016,32(2):212-221. |
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| Authors: | Lima A Heping Zhu Ruiyao Wang Tao Yan Xiaohu Su Lu Li Bingping Wang Shunwendoule N Guichun Qi and Huanmin Zhou |
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| Institution: | Key Laboratory of Biological Manufacturing of Inner Mongolia Autonomous Region College of Life Science, Inner Mongolia Agricultural University, Hohhot 010018, Inner Mongolia, China,Key Laboratory of Biological Manufacturing of Inner Mongolia Autonomous Region College of Life Science, Inner Mongolia Agricultural University, Hohhot 010018, Inner Mongolia, China,Key Laboratory of Biological Manufacturing of Inner Mongolia Autonomous Region College of Life Science, Inner Mongolia Agricultural University, Hohhot 010018, Inner Mongolia, China,Key Laboratory of Biological Manufacturing of Inner Mongolia Autonomous Region College of Life Science, Inner Mongolia Agricultural University, Hohhot 010018, Inner Mongolia, China,Key Laboratory of Biological Manufacturing of Inner Mongolia Autonomous Region College of Life Science, Inner Mongolia Agricultural University, Hohhot 010018, Inner Mongolia, China,Key Laboratory of Biological Manufacturing of Inner Mongolia Autonomous Region College of Life Science, Inner Mongolia Agricultural University, Hohhot 010018, Inner Mongolia, China,Key Laboratory of Biological Manufacturing of Inner Mongolia Autonomous Region College of Life Science, Inner Mongolia Agricultural University, Hohhot 010018, Inner Mongolia, China,Key Laboratory of Biological Manufacturing of Inner Mongolia Autonomous Region College of Life Science, Inner Mongolia Agricultural University, Hohhot 010018, Inner Mongolia, China,Key Laboratory of Biological Manufacturing of Inner Mongolia Autonomous Region College of Life Science, Inner Mongolia Agricultural University, Hohhot 010018, Inner Mongolia, China and Key Laboratory of Biological Manufacturing of Inner Mongolia Autonomous Region College of Life Science, Inner Mongolia Agricultural University, Hohhot 010018, Inner Mongolia, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Fat-1 gene expression vector marker gene PhiC31 integrase |
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