rnc基因的高表达及核糖核酸酶Ⅲ的纯化

根据大肠杆菌中核糖核酸酶Ⅲ(RnaseⅢ)含量很低的原因是RnaseⅢ能作用于自身基因(rmc)转录物5’端、负反馈调控其自身合成，设计RnaseⅢ高表达的方案。去除rnc基因5’侧能转录生成可被RnaseⅢ降解的RNA结构的序列，保留整个rnc基因及其5’侧的天然翻译起始序列，将之置于λPL启动子控制下，所构建的质粒在大肠杆菌中经诱导后高表达出：RnaseⅢ，其含量达细胞总蛋白质量的65％以上，并在菌体内形成包涵体。利用RnaseⅢ溶解度变化的特点，在低温、低盐条件中裂菌，并洗涤沉淀，在室温、高盐条件下溶解、过Q－sepharose FF柱，获得具有良好活性、电泳纯的RnaseⅢ，收获量为10－12mg／100ml培养液。同时还发现RnaseⅢ具有特异性结合ATP的活性。