| 人大隐静脉干细胞原代培养方法的改良 |
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| 引用本文： | 凌思英,张柏杨,滕勇,魏巍,喻武,孙建明,唐博,陈以宽.人大隐静脉干细胞原代培养方法的改良[J].生物工程学报,2018,34(6):973-982. |
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| 作者姓名： | 凌思英 张柏杨 滕勇 魏巍 喻武 孙建明 唐博 陈以宽 |
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| 作者单位： | 重庆医科大学附属第二医院 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金 (Nos. 81470583, 81270398)，重庆市卫生局基金 (No. 2012-2-052)，重庆市科委基金 (No. cstc2013jcyjA10089) 资助。 |
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| 摘 要： | 旨在探讨如何高效获取优质的人大隐静脉(Great saphenous vein)原代干细胞。大隐静脉剪碎后分别采用组织块贴壁法和Ⅱ型胶原酶消化法获取血管壁细胞。倒置显微镜下观察不同时间段两组血管壁细胞形态学变化,台盼蓝染色测定血管壁细胞存活率,流式分选CD34和CD117双阳性干细胞,免疫荧光进一步证实。细胞培养至第三代(P3)时组织块贴壁法提取的细胞出现纤维化老化,而酶消化法提取的细胞仍有集落样生长,细胞存活率分别为(91.7±1.2)%和(97.2±0.7)%(P=0.005)。流式分选结果显示:组织块法和酶消化法获得CD34和CD117双阳性细胞所占比例分别为(0.16±0.05)%和(0.44±0.07)%,差异有统计学意义(P=0.005)。免疫荧光染色显示,分选出的干细胞培养1周后组织块法获得双阳性干细胞的阳性率(89.41±2.06)%,酶消化法为(94.03±1.83)%,P0.05。流式细胞仪检测分选出的干细胞中CD31、VEGF2和SMA阳性率分别为(0.12±0.01)%、(0.19±0.02)%和(0.45±0.01)%,与阴性对照组差异无统计学意义(P0.05),排除成熟内皮细胞和平滑肌细胞存在的可能性。分选出的干细胞进行管腔形成实验进一步证实其具有向内皮分化的潜能。上述结果显示,采用酶消化法可以获得形态更好、数量更多、存活率相对更高的干细胞,可广泛用于临床和基础研究。
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| 关 键 词： | 大隐静脉，血管干细胞，原代培养，组织块贴壁法，酶消化法 |
| 收稿时间： | 2017/11/21 0:00:00 |
An improved method for stem cell derivation from human great saphenous vein |
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| Siying Ling,Baiyang Zhang,Yong Teng,Wei Wei,Wu Yu,Jianming Sun,Bo Tang and Yikuan Chen.An improved method for stem cell derivation from human great saphenous vein[J].Chinese Journal of Biotechnology,2018,34(6):973-982. |
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| Authors: | Siying Ling Baiyang Zhang Yong Teng Wei Wei Wu Yu Jianming Sun Bo Tang and Yikuan Chen |
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| Institution: | Second Affiliated Hospital, Chongqing Medical University, Chongqing 400010, China,Second Affiliated Hospital, Chongqing Medical University, Chongqing 400010, China,Second Affiliated Hospital, Chongqing Medical University, Chongqing 400010, China,Second Affiliated Hospital, Chongqing Medical University, Chongqing 400010, China,Second Affiliated Hospital, Chongqing Medical University, Chongqing 400010, China,Second Affiliated Hospital, Chongqing Medical University, Chongqing 400010, China,Second Affiliated Hospital, Chongqing Medical University, Chongqing 400010, China and Second Affiliated Hospital, Chongqing Medical University, Chongqing 400010, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | great saphenous vein vascular stem cells primary culture tissue attachment enzymatic digestion |
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