| 基于融合双亲短肽提高葡萄糖氧化酶的热稳定性 |
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| 引用本文： | 任春慧,张娟,堵国成,陈坚.基于融合双亲短肽提高葡萄糖氧化酶的热稳定性[J].生物工程学报,2018,34(7):1106-1116. |
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| 作者姓名： | 任春慧 张娟 堵国成 陈坚 |
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| 作者单位： | 江南大学工业生物技术教育部重点实验室;江南大学生物工程学院;江南大学糖化学与生物技术教育部重点实验室;江南大学粮食发酵工艺与技术国家工程实验室 |
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| 基金项目： | 江苏省产学研前瞻性联合研究项目 (No. BY2016022-39)，国家自然科学基金 (No. 31470160) 资助。 |
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| 摘 要： | 葡萄糖氧化酶(Glucose oxidase,简称GOD)可氧化葡萄糖生产葡萄糖酸及其衍生物,在新型无抗饲料添加剂的开发中具有良好的应用潜力,但其生产加工过程中尚存在热稳定差的瓶颈问题。本研究采用融合双亲短肽技术提高葡萄糖氧化酶的热稳定性,分别选取8种不同氨基酸长度、不同Linker连接的双亲短肽(Self-assembling peptides,SAPs)融合至黑曲霉来源的葡萄糖氧化酶的N端,构建了8种融合型酶SAP1-GS-GOD、SAP1-PT-GOD、SAP2-PT-GOD、SAP3-PT-GOD、SAP4-PT-GOD、SAP5-PT-GOD、SAP6-PT-GOD、SAP7-PT-GOD,并在毕赤酵母GS115中异源表达。获得的连接PT Linker的融合酶在60℃下孵育60 min后的相对酶活均高于初始酶。其中,融合酶SAP5-PT-GOD在60℃下孵育30 min的相对酶活为67%,是相同处理条件下初始酶相对酶活的10.9倍。同时,融合酶SAP1-PT-GOD、SAP2-PT-GOD、SAP3-PT-GOD、SAP5-PT-GOD的K_(cat)/K_m值较初始酶均有进一步的提高。研究表明,在葡萄糖氧化酶的N端融合以PT为Linker的目标双亲短肽能有效提高葡萄糖氧化酶的热稳定性,通过对融合酶分子内作用力进行分析,酶分子内氢键的增加对融合酶热稳定性的提高效果最为显著。上述研究获得的热稳定性提高的融合葡萄糖氧化酶及其效果机制分析对提高酶在加工和应用过程中的活性具有重要的研究意义和应用价值。
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| 关 键 词： | 融合蛋白，双亲短肽，葡萄糖氧化酶，热稳定性 |
| 收稿时间： | 2018/1/10 0:00:00 |
Enhancing thermal stability of glucose oxidase by fusing amphiphilic short peptide |
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| Chunhui Ren,Juan Zhang,Guocheng Du and Jian Chen.Enhancing thermal stability of glucose oxidase by fusing amphiphilic short peptide[J].Chinese Journal of Biotechnology,2018,34(7):1106-1116. |
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| Authors: | Chunhui Ren Juan Zhang Guocheng Du and Jian Chen |
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| Institution: | 1 Key Laboratory of Industrial Biotechnology, Ministry of Education, Jiangnan University, Wuxi 214122, Jiangsu, China; 4 College of Bioengineering, Jiangnan University, Wuxi 214122, Jiangsu, China,1 Key Laboratory of Industrial Biotechnology, Ministry of Education, Jiangnan University, Wuxi 214122, Jiangsu, China; 4 College of Bioengineering, Jiangnan University, Wuxi 214122, Jiangsu, China,2 Key Laboratory of Carbohydrate Chemistry and Biotechnology, Ministry of Education, Jiangnan University, Wuxi 214122, Jiangsu, China; 4 College of Bioengineering, Jiangnan University, Wuxi 214122, Jiangsu, China and 3 National Engineering Laboratory for Cereal Fermentation Technology, Jiangnan University, Wuxi 214122, Jiangsu, China; 4 College of Bioengineering, Jiangnan University, Wuxi 214122, Jiangsu, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | fused protein amphiphilic peptide glucose oxidase thermal stability |
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