| 抗菌肽VIP在毕赤酵母中的高效表达及鉴定 |
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| 引用本文： | 乔想金,李文新,白丽娟,胡巍,南怀燕.抗菌肽VIP在毕赤酵母中的高效表达及鉴定[J].生物工程学报,2018,34(6):1002-1011. |
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| 作者姓名： | 乔想金 李文新 白丽娟 胡巍 南怀燕 |
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| 作者单位： | 兰州兰石能源装备工程研究院生物制造工程技术中心;中国科学院西北生态环境研究院 |
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| 基金项目： | 兰石集团研究院技术创新项目 (No. G17-22) 资助。 |
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| 摘 要： | 基于人抗菌肽VIP(Vasoactive intestinal peptide)基因序列,按照毕赤酵母密码子偏好性设计引物;用SOE-PCR法扩增目的基因;然后将目的基因克隆至毕赤酵母分泌型表达载体pPICZαA上,构建VIP分泌表达菌株GS115-p PICZαA-vip。用甲醇诱导96 h收集上清,用质谱进行鉴定,结果显示分泌表达产物与人抗菌肽VIP理论值(3 326.82 Da)完全一致,表明人抗菌肽VIP成功得到分泌表达。琼脂糖凝胶扩散法实验结果显示,重组VIP对大肠杆菌Escherichia coli ATCC25922和金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus ATCC25923都有很强的抗菌活性,MIC(Minimal inhibitory concentration)分别为8 mmol/L和16 mmol/L。进一步细胞毒性和溶血性实验结果显示,重组VIP对正常细胞NCM460和IPEC-J2没有毒性,其对SD大鼠红细胞不具有溶血活性。通过透射电镜观察了VIP的抗菌机制,结果显示VIP主要通过破坏细胞膜的方式抑杀细菌。本研究为人抗菌肽VIP的开发应用和大量生产奠定了基础。
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| 关 键 词： | 抗菌肽，基因克隆，毕赤酵母，分泌表达，抗菌活性 |
| 收稿时间： | 2017/12/21 0:00:00 |
Expression and identification of an antimicrobial peptide VIP in Pichia pastoris |
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| Xiangjin Qiao,Wenxin Li,Lijuan Bai,Wei Hu and Huaiyan Nan.Expression and identification of an antimicrobial peptide VIP in Pichia pastoris[J].Chinese Journal of Biotechnology,2018,34(6):1002-1011. |
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| Authors: | Xiangjin Qiao Wenxin Li Lijuan Bai Wei Hu and Huaiyan Nan |
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| Institution: | 1 Lanzhou Lanshi Energy Equipment Engineering Institute CO., LTD, Lanzhou 730300, Gansu, China,1 Lanzhou Lanshi Energy Equipment Engineering Institute CO., LTD, Lanzhou 730300, Gansu, China,1 Lanzhou Lanshi Energy Equipment Engineering Institute CO., LTD, Lanzhou 730300, Gansu, China,1 Lanzhou Lanshi Energy Equipment Engineering Institute CO., LTD, Lanzhou 730300, Gansu, China and 1 Lanzhou Lanshi Energy Equipment Engineering Institute CO., LTD, Lanzhou 730300, Gansu, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | antimicrobial peptide gene cloning Pichia pastoris secretory expression antibacterial activity |
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