| SELEX法筛选宫颈癌前病变核酸适配子 |
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| 引用本文： | 李文慧,石大林,贾茹涵,杨静,张艳艳,陈卫,韩跃武.SELEX法筛选宫颈癌前病变核酸适配子[J].生物工程学报,2018,34(5):785-793. |
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| 作者姓名： | 李文慧 石大林 贾茹涵 杨静 张艳艳 陈卫 韩跃武 |
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| 作者单位： | 兰州大学生物化学与分子生物学实验室 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金 (No. 21272107)，甘肃科技支撑计划资助。 |
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| 摘 要： | 构建随机ssDNA文库,通过SELEX技术,以正常、炎性宫颈脱落细胞为反筛细胞,以上皮内低级别病变(CIN1)、上皮内高级别病变(CIN2、CIN3)和鳞状细胞癌脱落细胞为正筛细胞,经过12轮筛选特异性适配子高度富集得到宫颈癌前病变适配子库,经特异性、亲和力分析和细胞免疫荧光确立高特异性适配子CIN-Ap4可作为诊断宫颈癌前病变生物标志物,为宫颈癌前病变分子诊断奠定理论基础,提供新思路。利用Prime Premier 5.0设计构建了随机ssDNA文库并根据文库两端固定序列设计引物,对对称PCR和间接不对称PCR中的退火温度、循环数以及上、下游引物浓度比等条件进行优化,分析确定50μL反应体系中对称PCR的最佳反应条件为:最佳退火温度为49.5℃,最佳循环数为15个循环;间接不对称PCR的最佳反应条件为:50μL反应体系中上、下游引物浓度的最佳比例为80∶1,最佳循环数为35个循环。实验结果表明成功构建了寡核苷酸文库,在最适PCR条件下可获得理想的dsDNA和ssDNA,并具有良好的重复性,为顺利筛选适配子提供保证。
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| 关 键 词： | 宫颈癌前病变，指数式富集的配体系统进化技术，生物标志物，PCR条件优化 |
| 收稿时间： | 2017/10/20 0:00:00 |
Selection of DNA aptamers to cervical intraepithelial neoplasia by SELEX |
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| Wenhui Li,Dalin Shi,Ruhan Ji,Jing Yang,Yanyan Zhang,Wei Chen and Yuewu Han.Selection of DNA aptamers to cervical intraepithelial neoplasia by SELEX[J].Chinese Journal of Biotechnology,2018,34(5):785-793. |
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| Authors: | Wenhui Li Dalin Shi Ruhan Ji Jing Yang Yanyan Zhang Wei Chen and Yuewu Han |
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| Institution: | Biochemistry and Molecular Biology Laboratory, Lanzhou University, Lanzhou 730000, Gansu, China,Biochemistry and Molecular Biology Laboratory, Lanzhou University, Lanzhou 730000, Gansu, China,Biochemistry and Molecular Biology Laboratory, Lanzhou University, Lanzhou 730000, Gansu, China,Biochemistry and Molecular Biology Laboratory, Lanzhou University, Lanzhou 730000, Gansu, China,Biochemistry and Molecular Biology Laboratory, Lanzhou University, Lanzhou 730000, Gansu, China,Biochemistry and Molecular Biology Laboratory, Lanzhou University, Lanzhou 730000, Gansu, China and Biochemistry and Molecular Biology Laboratory, Lanzhou University, Lanzhou 730000, Gansu, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | cervical intraepithelial neoplasia (CIN) systematic evolution of ligands by exponential enrichment (SELEX) biomarker optimize of PCR conditions |
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