霍乱弧菌zot基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达

从霍乱疫苗菌中抽提基因组DNA，用PCR的方法扩增zot基因。序列分析表明，zot基因编码399个氨基酸，其中4个氨基酸与文献报道有差异。将zot基因插入含T7启动子的质粒pET28(a+)构建表达质粒pET-ZOT，转化大肠杆菌BL21(DE3)筛选表达菌株BLZOT。表达菌株经1mmol/L IPTG诱导表达3～5h后，表达大量ZOT蛋白，并形成包涵体。经SDS-PAGE分析重组ZOT蛋白分子量约为47kD，凝胶自动扫描分析表明，重组ZOT约占菌体可溶性蛋白量的15%以上。本工作为进一步研究蛋白多肽类药物的口服奠定了良好的基础。