Trametes sp.AH28-2漆酶A的诱导合成及其基因5'-端调控区的克隆与分析

Trametes sp．AH28—2漆酶同工酶的合成需要铜离子的存在，较高浓度的Cu^2 有利于漆酶合成。在以葡萄糖为碳源补加0．5mmol／L Cu^2 的培养基中生长时，发酵液漆酶活性为44．3u／L，同时补加4．0mmol／L邻甲苯胺时，漆酶酶活提高到71．0u／L；而在补加Cu^2 和邻甲苯胺的纤维二糖培养基中，酶活上升至2584u／L，为葡萄糖培养基的36．4倍。邻甲苯胺和铜离子诱导产生的漆酶同工酶组分，均为漆酶A(LacA)。竞争性RT—PCR分析表明，漆酶A基因(lacA)转录本的累积伴随有发酵液漆酶活性的增加，邻甲苯胺对lacA的调控发生在转录水平。lacA结构基因长2110bp，含有10个内含子；lacA的cDNA序列为1560bp，编码520aa的漆酶蛋白，其氨基酸序列与其它真菌漆酶具有较高的相似性。采用改进的反向PCR技术，扩增得到的lacA 5’-端调控区长1881bp，分析表明，该区域上分布有1个TATA框、7个CAAT框和多个潜在的顺式作用元件序列位点，包括5个MRE元件、9个CreA结合位点、4个XRE元件、2个STRE元件和7个氮因子调控位点等。这些序列位点的存在部分地对应了菌株摇瓶发酵奈件下lacA的表达规律。