地中海拟无枝菌酸菌U-32硝酸还原酶的基因克隆 |
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引用本文: | 李果龙,杨蕴刘,焦瑞身.地中海拟无枝菌酸菌U-32硝酸还原酶的基因克隆[J].生物工程学报,1994,10(3). |
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作者姓名: | 李果龙 杨蕴刘 焦瑞身 |
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作者单位: | 中国科学院上海植物生理研究所.上海200032 |
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摘 要: | outhern杂交分析表明在地中海拟无枝菌酸菌u-32染色体DNA和黑曲霉niaD(硝酸还原酶基因)之间存在着明显的同源性。利用异源niaD探针从地中海拟无枝菌酸菌u-32基因文库中筛选得到一个能与niaD杂交的5.0kb的Pst Ⅰ片段。该片段经同位素标记后能与地中海拟无枝菌酸菌u-32染色体上一个相同的Pst Ⅰ片段杂交,位于这一片段上的2.1kb sma Ⅰ—EcoR Ⅴ片段只能与以硝酸盐为唯一氮源的总RNA杂交,而不能与相同条件下以铵盐为唯一氮源的总RNA杂交,这些结果表明,所克隆到的5,0kb Pst Ⅰ DNA片段含有地中海拟无枝菌酸菌U-3z的硝酸还原酶基因。这是好氧细菌硝酸还原酶基因克隆的首次报道。由该酶蛋白分子量推测,其结构基因大小在1.5kb左右,进一步的杂交分析发现在5.0kb的Pstl片段中含有完整的NR基因。用20种限制酶对重组质粒pJLl进行了限制酶酶谱的构建。发现有10种酶在pJLl外源片段上无切点,6种酶为单切点,EcoR Ⅰ与Sma Ⅰ各有两个切点。
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关 键 词: | 地中海拟无枝菌酸菌,硝酸还原酶,基因克隆 |
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