| 超滤-高效液相色谱法检测pHLA复合物中的抗原肽北大核心CSCD |
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| 引用本文： | 应婷,程巧珍,陈春,廖学俊,胡华军.超滤-高效液相色谱法检测pHLA复合物中的抗原肽北大核心CSCD[J].生物工程学报,2022,38(3):1209-1217. |
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| 作者姓名： | 应婷 程巧珍 陈春 廖学俊 胡华军 |
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| 作者单位： | 中国计量大学 生命科学学院, 浙江 杭州 310018 |
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| 基金项目： | 国家重点研发计划(2018YFA0108403) |
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| 摘 要： | 重组HLA-Ⅰ类分子/抗原肽复合物(pHLA复合物)在研究人类T细胞特异性免疫应答中有重要用途。pHLA复合物的制备以基因工程及蛋白体外稀释折叠复性技术为基础,在体外复性体系中重组HLA-Ⅰ类分子正确折叠,并结合抗原肽形成复合物。本研究建立了一种超滤-高效液相色谱法(超滤-HPLC法)定量检测重组pHLA复合物中的抗原肽,尤其针对少量制备产物中抗原肽的检测。通过将重组HLA-Ⅰ类分子和抗原肽加入到复性缓冲液中,使重组HLA-Ⅰ类分子的重链(heavy chain,HC)与轻链(β2m)复性折叠,与含锚定残基的VYF抗原肽结合形成pHLA复合物,经超滤去除未结合的游离抗原肽VYF而保留复合物,最后将pHLA复合物经酸处理破坏其相互作用从而释放抗原肽,再超滤收集VYF抗原肽并进行HPLC检测,所测得的VYF抗原肽即为重组HLA-Ⅰ类分子与抗原肽相互作用所结合的抗原肽。结果显示,制备的重组pHLA复合物可被HLA-Ⅰ分子构象特异性抗体W6/32识别,这说明重组HLA-Ⅰ类分子折叠构象正确,可鉴定为pHLA复合物;而超滤-HPLC法也可检测到pHLA复合物中含有抗原肽VYF,因此将超滤-HPLC法用于检测pHLA复合物的方法可行。与Western blotting法相比,超滤-HPLC法定量检测抗原肽浓度范围为0–9μg/mL,可根据复合物中结合的抗原肽量来优化不同结合条件,以提高HLA-Ⅰ类分子折叠效率并促进HLA-Ⅰ类分子结合抗原肽,还可根据pHLA复合物结合的抗原肽含量计算复性体系中形成pHLA复合物的制备率。因此文中所建立的超滤-HPLC法可用于pHLA复合物制备过程的质量控制,在T细胞特异性免疫研究、人工抗原呈递细胞以及特异性四聚体探针应用开发方面都具有优势。
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| 关 键 词： | 超滤 高效液相色谱 重组HLA-Ⅰ类分子 抗原肽 折叠复性 |
| 收稿时间： | 2021/6/29 0:00:00 |
| 修稿时间： | 2021/9/10 0:00:00 |
Detection of the antigenic peptides in pHLA complexes by ultrafiltration-high performance liquid chromatography |
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| YING Ting,CHENG Qiaozhen,CHEN Chun,LIAO Xuejun,HU Huajun.Detection of the antigenic peptides in pHLA complexes by ultrafiltration-high performance liquid chromatography[J].Chinese Journal of Biotechnology,2022,38(3):1209-1217. |
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| Authors: | YING Ting CHENG Qiaozhen CHEN Chun LIAO Xuejun HU Huajun |
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| Institution: | College of Life Sciences, China Jiliang Universtiy, Hangzhou 310018, Zhejiang, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | ultrafiltration high performance liquid chromatogra (HPLC) recombinant HLA-I molecules antigen peptide refolding |
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