| 耻垢分枝杆菌EF-G敲低菌株的构建和耐药分析北大核心CSCD |
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| 引用本文： | 狄玉昌,白嘉诚,迟明哲,范伟兴,张雪莲.耻垢分枝杆菌EF-G敲低菌株的构建和耐药分析北大核心CSCD[J].生物工程学报,2022,38(3):1050-1060. |
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| 作者姓名： | 狄玉昌 白嘉诚 迟明哲 范伟兴 张雪莲 |
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| 作者单位： | 复旦大学 生命科学学院 遗传工程国家重点实验室, 上海 200433;中国动物卫生与流行病学中心, 山东 青岛 266032 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金(81971898,81673482)；国家重点研发计划(2016YFA0500601)；新疆建设兵团重点科技攻关项目(2020AB015) |
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| 摘 要： | GTPase延伸因子G(elongation factor G,EF-G)是蛋白质翻译过程中重要的翻译因子。作为唯一在翻译延伸和核糖体再生2个翻译环节发挥重要功能的翻译因子,EF-G成为潜在的抗菌药物作用靶点。耻垢分枝杆菌(Mycobacterium smegmetics,Msm)和结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)基因组中均存在2个EF-G同源编码基因,分别为Msm EFG1(MSMEG_1400)和Msm EFG2(MSMEG_6535),fusA1(Rv0684)和fusA2(Rv0120c)。基因突变库和生物信息学推测Msm EFG1(MSMEG_1400)和fusA1(Rv0684)是生长必需基因。为探究分枝杆菌中EF-G的生物学功能及特点,利用成簇的规律间隔的短回文重复序列干扰(clustered regularly interspaced short palindromic repeats interference,CRISPRi)技术构建了耻垢分枝杆菌中2个EF-G诱导型敲低菌株(Msm-ΔEFG1(KD)和Msm-ΔEFG2(KD)),研究发现EF-G2的敲低对细菌生长无影响,而EF-G1的敲低显著影响分枝杆菌的生长,成膜能力显著减弱、菌落形态显著变化、菌体长度显著增长,推测EF-G可能与细菌的分裂相关。最低抑菌浓度(minimal inhibitory concentration,MIC)实验结果表明,抑制EF-G1的表达可增强分枝杆菌对利福平、异烟肼、红霉素、夫西地酸、卷曲霉素等抗菌药物的敏感性,提示EF-G1可能成为未来抗结核药物筛选的潜在靶标,为探究EF-G在分枝杆菌中的生理功能及作为潜在药物靶标提供基础。
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| 关 键 词： | 耻垢分枝杆菌 EF-G 成簇规律间隔短回文重复序列干扰(CRISPRi) 最小抑菌浓度 耐药 |
| 收稿时间： | 2021/3/14 0:00:00 |
| 修稿时间： | 2021/4/29 0:00:00 |
Construction of EF-G knockdown strain of Mycobacterium smegmatis and drug resistance analysis |
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| DI Yuchang,BAI Jiacheng,CHI Mingzhe,FAN Weixing,ZHANG Xuelian.Construction of EF-G knockdown strain of Mycobacterium smegmatis and drug resistance analysis[J].Chinese Journal of Biotechnology,2022,38(3):1050-1060. |
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| Authors: | DI Yuchang BAI Jiacheng CHI Mingzhe FAN Weixing ZHANG Xuelian |
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| Institution: | State Key Laboratory of Genetic Engineering, School of Life Sciences, Fudan University, Shanghai 200433, China;Laboratory of Zoonosis, China Animal Health and Epidemiology Center, Qingdao 266032, Shangdong, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Mycobacterium smegmatis EF-G clustered regularly interspaced short palindromic repeats interference (CRISPRi) minimal inhibitory concentration (MIC) drug resistance |
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