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转基因克隆奶山羊大量生产重组人的抗凝血酶III蛋白质(rhATIII)
引用本文:邹贤刚,袁三平,鲜 建,赵雅琳,李狄尔,王玉阁,郝 茹,解居伦,刘身庆,杜 淼.转基因克隆奶山羊大量生产重组人的抗凝血酶III蛋白质(rhATIII)[J].生物工程学报,2008,24(1):117-123.
作者姓名:邹贤刚  袁三平  鲜 建  赵雅琳  李狄尔  王玉阁  郝 茹  解居伦  刘身庆  杜 淼
作者单位:青岛森淼生物技术研究所, 山东 266101;青岛森淼生物技术研究所, 山东 266101;青岛森淼生物技术研究所, 山东 266101;青岛森淼生物技术研究所, 山东 266101;青岛森淼生物技术研究所, 山东 266101;2 中国科学院遗传和发育生物学研究所, 北京100080;2 中国科学院遗传和发育生物学研究所, 北京100080;1 青岛森淼生物技术研究所, 山东 266101;1 青岛森淼生物技术研究所, 山东 266101;2 中国科学院遗传和发育生物学研究所, 北京100080
基金项目:国家973计划(No. 2000016107)和青岛市科技局科技发展计划资助(No. 2001KNS-2N-29)。
摘    要:利用转基因克隆奶山羊乳腺生物反应器大量生产重组人的抗凝血酶III(rhATIII)蛋白质。其中包括: 筛选出人的抗凝血酶Ⅲ蛋白基因的cDNA序列; 利用山羊的b-酪蛋白基因的启动区, 终止信号和Enterokinase蛋白酶酶切DNA序列, 构建在乳腺中特异表达rhATⅢ的表达载体。同时在转基因载体的末端连接一个新酶素筛选基因(Neomycin)。再以细胞转染、G418筛选和体细胞核移植(动物克隆)等过程, 最后获得含有人的抗凝血酶Ⅲ基因的转基因克隆奶山羊。我们共获得了5个原代转基因公羊。第一只克隆羊在出生后78 d死亡, 解剖表明: 羊的肺部和肾脏等器官有异常。其它克隆公羊经过与崂山种母羊交配, 得到转基因后代, 其中两个原代转基因羊的后代母羊已成熟、所获得的奶经蛋白质电泳证明: 转基因克隆羊后代奶中含有约60 kD大小的rhATⅢ糖蛋白; 经Elisa检测表明: 在奶中含有大量活性的rhATⅢ, 在来源于两个不同克隆公羊的后代母羊奶中的rhATⅢ含量分别为0.4 mg/L和3 g/L。此研究证明: 转基因奶山羊可以大量地生产具有很高活性的rhATⅢ。用这种方法生产的rhATⅢ通过蛋白质提纯, 制成注射针剂, 将可用于人的抗凝血酶III缺乏症的治疗、预防血栓和重大手术过程中的止血的作用等。

关 键 词:山羊    乳腺生物发应器    转基因    克隆    重组人的抗凝血酶Ⅲ(rhATⅢ)    胎儿成纤维细胞(FFC)
收稿时间:2007-03-10
修稿时间:2007-08-14

Large Scale Production of Recombinant Human Antithrombin III (rhATIII) in Transgenic Cloned Goats
Xiangang Zou,Sanping Yuan,Jian Xian,Yalin Zhao,Dier Li,Yuge Wang,Ru Hao,Julun Xie,Shenqing Liu and Miao Du.Large Scale Production of Recombinant Human Antithrombin III (rhATIII) in Transgenic Cloned Goats[J].Chinese Journal of Biotechnology,2008,24(1):117-123.
Authors:Xiangang Zou  Sanping Yuan  Jian Xian  Yalin Zhao  Dier Li  Yuge Wang  Ru Hao  Julun Xie  Shenqing Liu and Miao Du
Institution:Qingdao Samuels Biotechnology Research Institute, Qingdao 266101, China;1 Qingdao Samuels Biotechnology Research Institute, Qingdao 266101, China;1 Qingdao Samuels Biotechnology Research Institute, Qingdao 266101, China;1 Qingdao Samuels Biotechnology Research Institute, Qingdao 266101, China;1 Qingdao Samuels Biotechnology Research Institute, Qingdao 266101, China;2 Institute of Genetics and Developmental Biology, Chinese Academy of Sciences, Beijing 100080, China;2 Institute of Genetics and Developmental Biology, Chinese Academy of Sciences, Beijing 100080, China;1 Qingdao Samuels Biotechnology Research Institute, Qingdao 266101, China;1 Qingdao Samuels Biotechnology Research Institute, Qingdao 266101, China;2 Institute of Genetics and Developmental Biology, Chinese Academy of Sciences, Beijing 100080, China
Abstract:
Keywords:goat  mammary bio-reactor  transgenesis  nuclear transfer  rhATIII  foetal fibroblast cell(FFC)
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