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| 人源性天然抗体库的构建及淀粉样蛋白Aβ1-42寡聚体单链抗体的筛选和鉴定 | |
| 引用本文： | 包福祥,何金生,曹贵方,尹凡,王鑫,庞思媛,张莹,洪涛.人源性天然抗体库的构建及淀粉样蛋白Aβ1-42寡聚体单链抗体的筛选和鉴定[J].生物工程学报,2009,25(8). |
| 作者姓名： | 包福祥 何金生 曹贵方 尹凡 王鑫 庞思媛 张莹 洪涛 |
| 作者单位： | 1. 北京交通大学生命科学与生物工程研究院,北京,100044;内蒙古农业大学动物科学与医学学院,呼和浩特,010018 2. 北京交通大学生命科学与生物工程研究院,北京,100044 3. 内蒙古农业大学动物科学与医学学院,呼和浩特,010018 |
| 基金项目： | 国家高技术研究发展计划(863计划),北京交通大学科技基金 |
| 摘 要： | 本研究旨在利用噬菌体展示技术构建人源性天然抗体库,以可溶性Aβ1-42寡聚体对抗体库进行筛选获得针对低分子量Aβ1-42寡聚体的特异性单链抗体.利用RT-PCR法从10个健康人外周血淋巴细胞中得到全套人抗体VH和VL基因,经过重叠延伸PCR将VH和VL连接得到scFv片段,将scFv片段酶切后克隆至pCANTAB5E噬菌体载体,电转化TG1感受态菌,获得库容为2.5×109单链抗体库.经辅助噬菌体M13K07拯救,以可溶性Aβ1-42寡聚体为抗原,对抗体库进行4轮筛选,ELISA法筛选特异性识别Aβ1-42寡聚体的阳性克隆,将筛选到的阳性克隆B19转化至E coliHB2151菌,诱导表达可溶性scFv抗体.SDS-PAGE及Western blotting分析结果显示可溶性scFv抗体获得了正确表达,且能够与Aβ1-42三聚体及纤维特异性结合,亲和力(Kd)为9×10-6 mol/L.Aβ1-42寡聚体特异性单链抗体的获得为老年性痴呆(AD)的治疗研究奠定了基础. |
| 关 键 词： | 人源性天然抗体库 Aβ1-42寡聚体 单链抗体 老年性痴呆 |
Isolation and identification of a human single chain Fv antibody against amyloid-beta 1-42 soluble oligomers from a human phage display library |
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| Fuxiang Bao,Jinsheng He,Guifang Cao,Fan Yin,Xin Wang,Siyuan Pang,Ying Zhang,Tao Hong.Isolation and identification of a human single chain Fv antibody against amyloid-beta 1-42 soluble oligomers from a human phage display library[J].Chinese Journal of Biotechnology,2009,25(8). | |
| Authors: | Fuxiang Bao Jinsheng He Guifang Cao Fan Yin Xin Wang Siyuan Pang Ying Zhang Tao Hong |
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