抗鞘翅目δ－内毒素 及毒素基因文库的构建

研究了对鞘翅目昆虫有毒效的5个苏云金芽孢杆菌新蔚株YM一03、s曲04 04、YKI4－01、SH11—05、sphl6－O1伴孢晶体的蛋白质组成，以柳蓝叶甲为供试虫测定了它们的LC50。值，其中YM—03毒力最高。测定了YM－03晶体蛋白N－末端部分氨基酸序列。用琼脂糖凝胶电泳快速检测了5株菌的质粒组成，证明其质粒图型各不相同。以广谱的cosmtd质粒pLAFRI为载体，通过限制酶EcoRI部分酶解获得“目的”DNA片段，构建了菌株YM－03的总DNA文库，对17个抗性克隆的质粒进行酶切分析表明，其中古有外源片段的克隆占总数的76％，超过要求的理论值。以人工合成的杀鞘翅目基因的18bp保守序列片段为探针，筛选了近1200个抗性克隆，获得了3个阳性克隆，LE392(pBYM2)、LE392(pBYM3)和LE392(pBYM4)，毒力测定试验表明LE392(pBYM3)和LE392(pBYM4)有一定表达，表明其携带有δ－内毒素基因。