| 南极菌产琼胶酶aga3311的表达、性质及其降解特性 |
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| 引用本文： | 刘秀萌,李江,侯旭光,何培青.南极菌产琼胶酶aga3311的表达、性质及其降解特性[J].微生物学报,2016,56(9):1468-1476. |
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| 作者姓名： | 刘秀萌 李江 侯旭光 何培青 |
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| 作者单位： | 山东大学(威海)海洋学院, 山东 威海 264200,国家海洋局第一海洋研究所, 海洋生物活性物质重点实验室, 山东 青岛 266061,山东大学(威海)海洋学院, 山东 威海 264200,国家海洋局第一海洋研究所, 海洋生物活性物质重点实验室, 山东 青岛 266061 |
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| 基金项目： | 南北极环境综合考察与评估专项（CHINARE2014-01-05）；国家海洋局海洋生物活性物质与现代分析技术重点实验室开放基金（MBSMAT-2015-06）；青岛市应用基础研究计划项目（14-2-4-14-jch） |
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| 摘 要： | 【目的】本文通过对具有琼胶降解能力的南极菌Pseudoalteromonas sp.NJ21全基因组进行生物信息学分析,筛选获得琼胶酶疑似序列aga3311,采用基因工程手段对该基因的功能和性质进行了验证和分析。【方法】首先对aga3311进行克隆和表达;采用Ni-NTA对重组酶进行纯化;DNS-还原糖法测定重组酶的酶学性质;用薄层层析(TLC)和质谱(MS)技术对Aga3311的酶解产物进行分析。【结果】构建的重组表达质粒p ET-30(a)+aga3311能够在工程菌E.coli BL21(DE3)中实现高效表达,其中可溶性表达为30%左右;纯化的重组酶Aga3311分子量为87 k Da,其最适作用温度为35°C,30–45°C的范围内稳定性较高,50°C则迅速失活,具有热不稳定的特征;最适p H为7.0,在p H 4.0–10.0的范围内仍能保持50%以上的活性;金属离子Fe~(3+)、Be~(2+)、Zn~(2+)和Ca~(2+)均能显著提高Aga3311的活性,特别是Ca~(2+)使其酶活提高1倍。该酶的酶解终产物经TLC和质谱分析主要为新琼二糖。【结论】重组酶Aga3311为Glyco_hydro_42家族的外切型β-琼胶酶,能够特异性降解琼脂糖生成新琼二糖。
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| 关 键 词： | 琼胶酶 表达 酶学性质 新琼二糖 |
| 收稿时间： | 2015/12/11 0:00:00 |
| 修稿时间： | 2016/2/10 0:00:00 |
Expression and characterization of the agarase gene aga3311 from an Antarctic bacterium |
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| Xiumeng Liu,Jiang Li,Xuguang Hou and Peiqing He.Expression and characterization of the agarase gene aga3311 from an Antarctic bacterium[J].Acta Microbiologica Sinica,2016,56(9):1468-1476. |
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| Authors: | Xiumeng Liu Jiang Li Xuguang Hou and Peiqing He |
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| Institution: | Marie College, Shandong University, Weihai 264200, Shandong Province, China,Key Laboratory of Marine Bioactive Substances, the First Institute of Oceanography, SOA, Qingdao 266061, Shandong Province, China,Marie College, Shandong University, Weihai 264200, Shandong Province, China and Key Laboratory of Marine Bioactive Substances, the First Institute of Oceanography, SOA, Qingdao 266061, Shandong Province, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | agarase expression enzymatic characterization neoagarobiose |
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