| 神经营养素-3基因的人工合成及其在毕赤酵母中的分泌性表达 |
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| 引用本文： | 张朝春,梁伟锋,杨希才.神经营养素-3基因的人工合成及其在毕赤酵母中的分泌性表达[J].微生物学报,2004,44(2):210-214. |
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| 作者姓名： | 张朝春 梁伟锋 杨希才 |
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| 作者单位： | 中国科学院微生物研究所,北京,100080 |
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| 摘 要： | 根据人神经营养素3（Human neurotrohin3，hNT3）的基因序列，把编码氨基酸的密码子转换成毕赤酵母（Pichia pastoris）偏爱的形式，设计了10条36～59nt的寡聚核苷酸引物，通过5次连续PCR反应，获得了人工合成的NT3 cDNA片段（简称NT3b基因）。将合成的NT3b基因克隆到pPIC9K质粒上，获得重组表达载体pPIC9KNT3b。将重组表达载体pPIC9KNT3b和pPIC9KhNT3分别电击转化宿主毕赤酵母GS115菌株，经筛选得到重组转化子。不同转化子经甲醇诱导，表达产物进行SDSPAGE检测、Western blot检测和ELISA分析，结果表明，NT3b基因和hNT3基因成功获得分泌性表达，从整体水平上，使用偏爱密码子的NT3b基因在毕赤酵母GS115菌株中的表达明显优越于hNT3基因(x2=4.334,P<0.05)，表达量在诱导后72～96h最高，达到31mg/L左右。
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| 关 键 词： | 神经营养素3， 毕赤酵母， 偏爱密码子， 基因合成， 分泌性表达 |
| 文章编号： | 0001-6209(2004)02-0210-05 |
| 修稿时间： | 2003年6月23日 |
Synthesis of Human Neurotrohin-3 Gene and Its Expression in Pichia pastoris |
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| ZHANG Chao_Chun LIANG Wei_Feng YANG Xi_Cai.Synthesis of Human Neurotrohin-3 Gene and Its Expression in Pichia pastoris[J].Acta Microbiologica Sinica,2004,44(2):210-214. |
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| Authors: | ZHANG Chao_Chun LIANG Wei_Feng YANG Xi_Cai |
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| Institution: | ZHANG Chao_Chun LIANG Wei_Feng YANG Xi_Cai+* |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Neurotrohin-3 Pichia pastoris Optimal codons Synthesis of gene Secretory expression |
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