| 基于CRISPR/Cas13a的金黄色葡萄球菌mecA耐药基因检测方法的建立 |
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| 引用本文： | 胡强,李浩,胡晓丰,韩尧,孙岩松,柳燕.基于CRISPR/Cas13a的金黄色葡萄球菌mecA耐药基因检测方法的建立[J].微生物学报,2023,63(9):3628-3640. |
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| 作者姓名： | 胡强 李浩 胡晓丰 韩尧 孙岩松 柳燕 |
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| 作者单位： | 安徽医科大学基础医学院, 安徽 合肥 230032;中国人民解放军军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所, 北京 100071;中国人民解放军疾病预防控制中心, 北京 100071 |
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| 基金项目： | 国家重点研发计划(2021YFC2301100) |
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| 摘 要： | 【目的】 针对目前耐药基因检测通常需要依赖专业检测设施和设备,仍缺乏耐药基因快速检测方法这一问题,旨在建立一种基于成簇规律间隔的短回文重复序列(clustered regularly interspaced short palindromic repeats, CRISPR)的金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus) mecA耐药基因快速检测方法。【方法】 首先在mecA基因序列的保守区中设计筛选出灵敏度较高的重组酶介导链替换核酸扩增(recombinase aided amplification, RAA)引物和CRISPR RNA (CRISPR RNA, crRNA),通过结合消线法核酸检测试纸技术(easy-readout and sensitive enhanced, ERASE)建立针对mecA基因的检测方法,最后利用模拟样本及临床分离样本对建立的新方法与传统方法进行比较。【结果】 成功筛选出了1组针对mecA耐药基因的高效扩增引物和crRNA,并建立了基于CRISPR-ERASE的mecA耐药基因高灵敏核酸检测方法,最低检出限为10 copies/μL,在32株临床分离的金黄色葡萄球菌中,该方法共检出24株mecA耐药基因阳性菌株,与药敏试验及荧光定量PCR (quantitative real-time PCR, qPCR)检测结果符合率为100%。【结论】 建立了一种基于CRISPR-ERASE核酸检测试纸技术的简单、高灵敏的mecA耐药基因检测方法。
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| 关 键 词： | CRISPR 等温扩增 mecA 核酸检测 ERASE试纸 |
| 收稿时间： | 2023/1/14 0:00:00 |
| 修稿时间： | 2023/3/27 0:00:00 |
A CRISPR/Cas13a-based detection method for the drug resistance gene mecA of Staphylococcus aureus |
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| HU Qiang,LI Hao,HU Xiaofeng,HAN Yao,SUN Yansong,LIU Yan.A CRISPR/Cas13a-based detection method for the drug resistance gene mecA of Staphylococcus aureus[J].Acta Microbiologica Sinica,2023,63(9):3628-3640. |
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| Authors: | HU Qiang LI Hao HU Xiaofeng HAN Yao SUN Yansong LIU Yan |
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| Institution: | School of Basic Medical Sciences, Anhui Medical University, Hefei 230032, Anhui, China;Institute of Microbiology and Epidemiology, Academy of Chinese People''s Liberation Army Military Medical Sciences, Beijing 100071, China;Chinese People''s Liberation Army Center for Disease Control and Prevention, Beijing 100071, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | CRISPR isothermal amplification mecA nucleic acid detection ERASE strips |
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