| 双退火温度PCR扩增DNA |
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| 引用本文： | 黄亚威,杨昂,上官云杰,贺添艳,徐文选,刘亮伟.双退火温度PCR扩增DNA[J].微生物学报,2017,57(8):1262-1269. |
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| 作者姓名： | 黄亚威 杨昂 上官云杰 贺添艳 徐文选 刘亮伟 |
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| 作者单位： | 河南农业大学生命科学学院, 河南 郑州 450002,河南农业大学生命科学学院, 河南 郑州 450002,河南农业大学生命科学学院, 河南 郑州 450002,河南农业大学生命科学学院, 河南 郑州 450002,河南农业大学生命科学学院, 河南 郑州 450002,河南农业大学生命科学学院, 河南 郑州 450002;农业部农业酶工程重点实验室, 河南 郑州 450002 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金（31371831） |
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| 摘 要： | 【目的】与设置单一退火温度的常规PCR(S-T_m PCR)不同,本研究探讨双退火温度PCR(D-T_m PCR)由高到低设置2条引物各自退火温度。【方法】以PxF61和VPel为正/反向引物,用Q5 DNA聚合酶扩增4.3 kb的模式DNA pET20b-Xyn(黑曲霉木聚糖酶基因)。PCR程序为:98°C预变性3 min,30次循环{98°C变性30 s,设置双退火T_(m1) 70°C(Px F61)退火15 s、T_(m2) 62°C(VPel)退火15 s],72°C延伸130 s}。【结果】与S-T_m PCR(61°C)相比,D-T_m PCR扩增4.3 kb的目的条带亮度更高,减少2条杂带;经25次循环目的 DNA产物量最高。D-T_m PCR用于长片段引物扩增5.3 kb重组质粒DNA条带更明显。【结论】D-T_m PCR直接扩增目的条带,避免了探讨T_m的麻烦,不要求2条引物T_m相近,从理论上更加清晰地认识引物与各自模板分步退火过程。
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| 关 键 词： | 双退火温度 PCR DNA |
| 收稿时间： | 2017/1/6 0:00:00 |
| 修稿时间： | 2017/4/27 0:00:00 |
Amplification of DNA with double annealing temperature PCR |
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| Yawei Huang,Ang Yang,Yunjie Shangguan,Tianyan He,Wenxuan Xu and Liangwei Liu.Amplification of DNA with double annealing temperature PCR[J].Acta Microbiologica Sinica,2017,57(8):1262-1269. |
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| Authors: | Yawei Huang Ang Yang Yunjie Shangguan Tianyan He Wenxuan Xu and Liangwei Liu |
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| Institution: | Life Science College, Henan Agricultural University, Zhengzhou 450002, Henan Province, China,Life Science College, Henan Agricultural University, Zhengzhou 450002, Henan Province, China,Life Science College, Henan Agricultural University, Zhengzhou 450002, Henan Province, China,Life Science College, Henan Agricultural University, Zhengzhou 450002, Henan Province, China,Life Science College, Henan Agricultural University, Zhengzhou 450002, Henan Province, China and Life Science College, Henan Agricultural University, Zhengzhou 450002, Henan Province, China;Key Laboratory of Enzyme Engineering of Agricultural Microbiology, Ministry of Agriculture, Zhengzhou 450002, Henan Province, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Double annealing temperature PCR DNA |
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