| 酿酒酵母二腺苷四磷酸磷酸解酶Ⅰ片段的表达、纯化及晶体培养研究 |
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| 引用本文： | 李文哲,张钧玮,徐宁宇,周丛照,陈宇星.酿酒酵母二腺苷四磷酸磷酸解酶Ⅰ片段的表达、纯化及晶体培养研究[J].微生物学报,2008,48(11):1537-1542. |
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| 作者姓名： | 李文哲 张钧玮 徐宁宇 周丛照 陈宇星 |
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| 作者单位： | 1. 同济大学生命科学与技术学院,上海,200092
2. 中国科技大学生命学院,合肥,230026 |
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| 摘 要： | 目的]为了培养用于X-衍射的酿酒酵母二腺苷四磷酸磷酸解酶Ⅰ的蛋白晶体,为研究该酶的三维结构和功能打下基础;方法]构建了表达酿酒酵母二腺苷四磷酸磷酸解酶Ⅰ片段(Apaldn16)的表达质粒,用核苷酸序列分析证明了克隆片段的正确性.将重组载体转化大肠杆菌表达菌株BL21(DE3),经.IPTG诱导后,用SDS-PAGE检测了蛋白的表达情况.将粗蛋白用Ni-NTA亲和层析分离,收集组分进一步用Superdex 75分子筛纯化.纯化后的蛋白用SDS-PAGE和质谱检验其纯度和正确性,然后用悬滴气相扩散法进行了蛋白结晶条件的初筛.结果]成功地用大肠杆菌可溶性地高效表达了Apaldn16蛋白.得到了分子量约为36 kD的单一蛋白条带,纯度在95%以上.质谱结果证明该蛋白纯度高,分子量正确.将纯化后的蛋白用悬滴气相扩散法进行晶体初筛,得到了针状簇晶.此晶体经SDS-PAGE检测,证明为Apaldn16蛋白晶体.结论]利用大肠杆菌高效表达体系可以正确表达Apalan16蛋白,蛋白经过纯化后,用悬滴气相扩散法可以生长出针状晶体,适合于进一步的三维结构研究.
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| 关 键 词： | 二腺苷四磷酸磷酸解酶Ⅰ 酿酒酵母 表达 纯化 结晶 |
| 收稿时间： | 2008/5/30 0:00:00 |
Expression, purification and crystallization of a truncated Saccharomyces cerevisiae diadenosion 5' ,5"'-p1,p4 -tetraphosphate phosphorylase Ⅰ |
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| Wenzhe Li,Junwei Zhang,Ningyu Xu,Congzhao Zhou and Yuxing Chen.Expression, purification and crystallization of a truncated Saccharomyces cerevisiae diadenosion 5'''' ,5"''''-p1,p4 -tetraphosphate phosphorylase Ⅰ[J].Acta Microbiologica Sinica,2008,48(11):1537-1542. |
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| Authors: | Wenzhe Li Junwei Zhang Ningyu Xu Congzhao Zhou and Yuxing Chen |
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| Institution: | School of Life Science and Technology Tongji University, Shanghai 200092, China;School of Life Science and Technology Tongji University, Shanghai 200092, China;School of Life Science and Technology Tongji University, Shanghai 200092, China;(2School of Life Sciences, University of Science and Technology of China, Hefei 230026, China);(2School of Life Sciences, University of Science and Technology of China, Hefei 230026, China) |
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