短双歧杆菌α-D-半乳糖苷酶基因aga1在大肠杆菌中的高效表达

短双歧杆菌（Bifidobacterium breve 203）α_D_半乳糖苷酶基因(aga1)被克隆到大肠杆菌温度诱导表达质粒pBV220中，构建重组质粒pBVaga1，转入大肠杆菌进行温度诱导表达，得到的重组酶Aga1在大肠杆菌DH5α、DH10B和BL21中的比活分别为28.08、19.44和13.85U/mg， 均高于短双歧杆菌α_D_半乳糖苷酶的比活1.76U/mg。重组质粒pBVaga1在E. coli BL21中稳定性较好。重组酶Aga1蛋白亚基分子量约67kD，最适反应温度为45℃，酶在40℃以下稳定，60℃仅剩余约5%的酶活性，70℃时酶全部失活；最适反应pH为4.0～4.4，酶在pH 3.6～6.0范围内稳定；酶对p_硝基苯酚_α_半乳糖苷的Km＝1.43mmol/L，Vmax＝35.71μmol/(L·min)，对蜜二糖的Km＝261mmol/L，Vmax＝63.69μmol/(L·min)；酶在蜜二糖、棉子糖水解体系中不显示转糖基活性。结果说明Aga1与已经报道的一种短双歧杆菌的α_D_半乳糖苷酶不同，是新发现的一种短双歧杆菌的α_D_半乳糖苷酶。