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| 苏云金芽胞杆菌sigK 基因插入失活突变体的特点及其对cry3A基因启动子活性的影响 | |
| 引用本文： | 杜立新,魏娟,韩丽丽,陈榛,张杰,宋福平,黄大昉.苏云金芽胞杆菌sigK 基因插入失活突变体的特点及其对cry3A基因启动子活性的影响[J].微生物学报,2011,51(9):1177-1184. |
| 作者姓名： | 杜立新 魏娟 韩丽丽 陈榛 张杰 宋福平 黄大昉 |
| 作者单位： | 1. 河北农业大学植物保护学院,保定071001;中国农业科学院植物保护研究所,植物病虫害生物学国家重点实验室,北京100193;河北省农林科学院植物保护研究所,保定071000 2. 中国农业科学院植物保护研究所,植物病虫害生物学国家重点实验室,北京100193 3. 中国农业科学院生物技术研究所,北京,100081 |
| 基金项目： | 国家“973项目”(2009CB118902);国家自然科学基金(31070083) |
| 摘 要： | 摘要: 【目的】构建苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis，简称Bt) sigK 基因插入失活突变体，分析突变体特点并明确其对cry3A 基因启动子的影响。【方法】采用同源重组技术在苏云金芽胞杆菌HD-73 菌株sigK 基因中插入卡那霉素抗性基因，构建了sigK 基因插入失活突变体。通过生长曲线测定、扫描电子显微镜观察晶体、芽胞形成情况和芽胞计数及SDS-PAGE 等方法分析了突变体的特点; 构建了遗传恢复菌株对上述性状进行了功能验证; 利用启动子融合lacZ 技术检测了cry3A 基因启动子的转录活性。【结果】获得了苏云金芽胞杆菌HD-73 菌株sigK 基因突变体，生长曲线测定表明，突变体较出发菌株在稳定期后期生长较慢; 扫描电子显微镜观察和芽胞计数分析显示，突变体丧失了形成芽胞和晶体的能力; SDS-PAGE 分析表明突变体中伴胞晶体蛋白的表达量明显低于出发菌株和恢复菌株。利用载体pHT315 携带sigK 基因及其启动子在突变株中表达，所获得的遗传恢复菌株恢复了突变株产生芽胞和晶体的能力; sigK 基因的突变可以提高cry3A 基因启动子在产胞后期的转录活性，对cry3A 启动子指导的Cry 蛋白表达量没有显著影响。【结论】本研究证明sigK 基因为苏云金芽胞杆菌芽胞形成所必需，并影响伴胞晶体蛋白的产量; sigK 基因功能的丧失有利于cry3A 基因启动子在产胞后期的转录。 |
| 关 键 词： | 关键词: 苏云金芽胞杆菌，sigK 基因突变体，cry3A 基因启动子，芽胞形成 |
| 收稿时间： | 3/1/2011 12:00:00 AM |
| 修稿时间： | 3/2/2011 12:00:00 AM |
Characterization of Bacillus thuringiensis sigK disruption mutant and its influence on activation of cry3A promoter |
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| Lixin Du,Juan Wei,Lili Han,Zhen Chen,Jie Zhang,Fuping Song and Dafang Huang.Characterization of Bacillus thuringiensis sigK disruption mutant and its influence on activation of cry3A promoter[J].Acta Microbiologica Sinica,2011,51(9):1177-1184. | |
| Authors: | Lixin Du Juan Wei Lili Han Zhen Chen Jie Zhang Fuping Song and Dafang Huang |
| Institution: | Lixin Du1,2,3,Juan Wei2,Lili Han2,Zhen Chen2,Jie Zhang2,Fuping Song2,Dafang Huang4 1College of Plant Protection,Agricultural University of Hebei,Baoding 071001,China 2State Key Laboratory for Biology of Plant Diseases and Insect Pests,Institute of Plant Protection,Chinese Academy of Agricultural Sciences,Beijing 100193,China 3Institute of Plant Protection,Hebei Academy of Agricultural and Forestry Sciences,Baoding 071000,China 4Biotechnology Research Institute,Beijin... |
| Abstract: | |
| Keywords: | Bacillus thuringiensis sigK gene mutant cry3A gene promoter sporulation |
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