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极端嗜热菌Thermus thermophilus HB8中天冬氨酸转氨酶在大肠杆菌中的表达、纯化及酶学性质研究
引用本文:周华,洪媛,严明,许琳.极端嗜热菌Thermus thermophilus HB8中天冬氨酸转氨酶在大肠杆菌中的表达、纯化及酶学性质研究[J].微生物学报,2007,23(2).
作者姓名:周华  洪媛  严明  许琳
作者单位:南京工业大学制药与生命科学学院, 南京 210009;南京工业大学制药与生命科学学院, 南京 210009;南京工业大学制药与生命科学学院, 南京 210009;南京工业大学制药与生命科学学院, 南京 210009
基金项目:国家973项目(No.2003CB716004)和国家自然科学重点基金项目(No.20336010)资助。
摘    要:为获得具有热稳定性的天冬氨酸转氨酶,从极端嗜热细菌Thermus thermophilus HB8中克隆得到天冬氨酸转氨酶基因aspC,并在大肠杆菌BL21(DE3)和Rosetta(DE3)中进行表达,发现在Rosetta(DE3)中具有较高的表达量。重组酶的最适反应pH是7.0,37 ℃下在pH8~10的缓冲液中保温1 h酶活几乎不改变。重组酶反应的最适温度为75 ℃,酶活稳定的温度范围为25~55℃。重组酶在65℃时半衰期为3.5h,75℃时为2.5h。重组酶的KmKG为7.559mmol/L,VmaxKG为0.086mmol/(L·min),KmAsp为2.031mmol/L,VmaxAsp为0.024mmol/(L·min)。Ca2+、Fe3+、Mn2+等金属离子对酶活性有微弱抑制作用。

关 键 词:天冬氨酸转氨酶    Thermus  thermophilus  HB8    表达    纯化    酶学性质

Expression, Purification and Enzymatic Characterization of Thermus thermophilus HB8 Aspartate Aminotransferase in Escherichia coli
ZHOU Hu,HONG Yuan,YAN Ming and XU Lin.Expression, Purification and Enzymatic Characterization of Thermus thermophilus HB8 Aspartate Aminotransferase in Escherichia coli[J].Acta Microbiologica Sinica,2007,23(2).
Authors:ZHOU Hu  HONG Yuan  YAN Ming and XU Lin
Institution:College of Life Science and Pharmacy, Nanjing University of Technology, Nanjing 210009, China;College of Life Science and Pharmacy, Nanjing University of Technology, Nanjing 210009, China;College of Life Science and Pharmacy, Nanjing University of Technology, Nanjing 210009, China;College of Life Science and Pharmacy, Nanjing University of Technology, Nanjing 210009, China
Abstract:
Keywords:aspartate aminotransferase  Thermus thermophilus HB8  expression  purification  characterization
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