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| 苏云金芽胞杆菌cry1Ac与烟草几丁质酶tchiB双价基因克隆表达及其杀虫增效作用研究 | |
| 引用本文： | 丁学知,罗朝晖,夏立秋,高必达,孙运军,付祖姣,刘飞,胡胜标,莫湘涛,张友明.苏云金芽胞杆菌cry1Ac与烟草几丁质酶tchiB双价基因克隆表达及其杀虫增效作用研究[J].微生物学报,2007,47(6). |
| 作者姓名： | 丁学知 罗朝晖 夏立秋 高必达 孙运军 付祖姣 刘飞 胡胜标 莫湘涛 张友明 |
| 作者单位： | 1. 湖南师范大学生命科学学院,微生物分子生物学湖南省重点实验室,长沙,410081;湖南农业大学生物安全科学技术学院,长沙,410128 2. 湖南师范大学生命科学学院,微生物分子生物学湖南省重点实验室,长沙,410081 3. 湖南农业大学生物安全科学技术学院,长沙,410128 |
| 基金项目： | 国家高技术研究发展计划(863计划);国家自然科学基金;湖南省自然科学基金;农业部农作物病虫害生物防治重点实验室开放基金 |
| 摘 要： | 将苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)4.0718菌株质粒上的cry1Ac基因和烟草几丁质酶tchiB基因(去掉信号肽或去信号肽再加肠激酶位点)构建了重组基因。经过双酶切和亚克隆,将带有cry1Ac基因上游启动序列和下游终止序列的重组基因片段克隆至穿梭载体pHT315,分别构建重组质粒pHUAccB6、pHUAccB7,在大肠杆菌中扩增后,将两个重组质粒分别电转化苏云金芽胞杆菌无晶体突变株XBU001中,获得重组菌株HAccB6和HAccB7。经液体双相胞晶分离提取离心后,将晶体和上清液分别进行SDS-PAGE分析,双价基因重组与cry1Ac基因在无晶体突变株中表达量相比较,几丁质酶活性提高5.2倍,双价重组蛋白表达量显著提高,主要产生130kDa蛋白条带。经定量分析:双价重组目的晶体蛋白占总蛋白量的61.38%;Cry1Ac蛋白占总蛋白量的42%。发酵上清液经60%硫酸铵沉淀,显示出一条分子量为18kDa新蛋白条带。经原子力显微镜和电子显微镜观察,表达后的重组蛋白呈菱形或椭原形晶体,其规格约为1.5×3.0μm;经生测分析,重组菌株HAccB6和HAccB7毒力相近,与HAc菌株比较毒力提高4.5倍,对棉铃虫(Helicourpa armigora)具有高效杀虫活性,其3dLC50值分别为9.1μg/mL和11.34μg/mL。研究结果表明,烟草几丁质酶与cry1Ac双价基因重组表达产物具有杀虫增效作用。 |
| 关 键 词： | 苏云金芽胞杆菌 cry1Ac基因 tchiB基因 原毒素 电转化 杀虫增效作用 |
Cloning and expression of the cry1Ac-tchiB fusion gene from Bacillus Thuringinesis and Tobacco and its insecticidal synergistic effect |
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| DING Xue-zhi ,LUO Zhao-hui,XIA Li-qiu ,GAO Bi-da ,SUN Yun-jun.Cloning and expression of the cry1Ac-tchiB fusion gene from Bacillus Thuringinesis and Tobacco and its insecticidal synergistic effect[J].Acta Microbiologica Sinica,2007,47(6). | |
| Authors: | DING Xue-zhi LUO Zhao-hui XIA Li-qiu GAO Bi-da SUN Yun-jun |
| Institution: | DING Xue-zhi~ 1,2,LUO Zhao-hui~1,XIA Li-qiu~ 1,GAO Bi-da~ 2,SUN Yun-jun~1 |
| Abstract: | |
| Keywords: | Bacillus thuringiensis cry1Ac gene tchiB protoxin electropration insecticidal enhancing effect |
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