海南生态区植物根际解磷细菌的筛选及分子鉴定

【目的】了解海南酸性土壤解磷细菌溶解Ca3(PO4)2和FePO4特性；筛选高效稳定的解磷菌株，为应用研究提供菌源。【方法】采集海南21种植物的根际土样品，用营养琼脂、结晶紫-营养琼脂、酵母粉-甘露醇琼脂，稀释涂布法分离土壤细菌，选取平板上菌落形态有明显区别的代表性菌落，用最低营养琼脂进行纯化；Ⅰ筛用Ca3(PO4)2固体培养基培养5 d，挑取有溶磷圈的菌落；Ⅱ筛用Ca3(PO4)2培养液在32℃、200 r/min条件培养6 d，挑取解磷量大于200 mg/L的菌株；Ⅲ筛是在4次继代培养及每次15 d的4℃保藏后，用Ca3(PO4)2培养液培养6 d，挑取解磷量大于200 mg /L的菌株。称Ⅲ筛的选出菌株为高效稳定的解磷细菌(PSBHS)，用FePO4培养液对PSBHS培养6 d，并测定解磷量；用简并引物扩增PSBHS 16S rDNA基因一个长度约1460 bp的片段，测序后，通过Blast检索同源序列，鉴定解磷细菌分类。【结果】共分离到363个代表性菌株，通过Ⅰ筛、Ⅱ筛、Ⅲ筛的代表性菌株分别是126个、45个、14个；14个PSBHS在Ca3(PO4)2培养液中经6 d培养，解磷量达201.0 mg/L ~623.3 mg/L，培养结束时pH值(3.82~4.34)与解磷量呈极显著负相关（r = -0.8155)。14个PSBHS在FePO4培养液中经6 d培养，解磷量只有1.6 mg/L ~34.2 mg/L，培养结束时pH值(2.87~5.67)与解磷量也呈极显著负相关(r = -0.6836)。16S rDNA序列分析，确定了6个PSBHS为Acinetobacter, 3个为Pseudomonas, 3个为Serratia, 2个为Enterobacter。

Screening and molecular identification of phosphate- solubilizing bacteria in rhizosphere soils in Hainan ecosystem