| 应用基因敲除快速构建大肠杆菌突变体改造脂肪酸代谢途径 |
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| 引用本文： | 曲璟秋,刘翠花,刘伟丰,陶勇,朱坤.应用基因敲除快速构建大肠杆菌突变体改造脂肪酸代谢途径[J].微生物学报,2013,53(6):608-614. |
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| 作者姓名： | 曲璟秋 刘翠花 刘伟丰 陶勇 朱坤 |
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| 作者单位： | 中国科学院微生物研究所,北京,100190 |
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| 基金项目： | 自然科学基金项目(31170040);微生物资源前期开发国家重点实验室开放课题项目(20110603) |
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| 摘 要： | 【目的】基因敲除技术是研究基因功能的重要手段。我们试图建立一种快速、高效的大肠杆菌基因敲除方法。【方法】利用大肠杆菌(Escherichia coli)BW25113单基因缺失体Keio文库,将经典的Red同源重组技术与P1噬菌体转导技术相结合,对E.coli MG1655脂肪酸代谢基因进行快速敲除。【结果】获得了大肠杆菌β-氧化途径的缺失菌株△fadD、△fadE和△fadD-△fadE;脂肪酸合成途径缺失菌株△fabH、△fabF和△fabH-△fabF。敲除fadD和fadE对生长情况没有影响;敲除fabH后,生长速度明显减慢;敲除fabF对生长几乎没有影响。FadD、FadE及双敲缺失体的脂肪酸含量18.2 mg/L、20.0mg/L和19.2 mg/L,略高于野生型17.5 mg/L;FabH、FabF及双敲缺失体的含量分别为12.6 mg/L、15.2 mg/L和11.2 mg/L,明显低于野生型。【结论】在单基因突变体文库基础上,利用P1噬菌体转导、Red同源重组和抗性基因消除进行基因敲除,简化了构建大肠杆菌单基因和多重突变体的方法。
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| 关 键 词： | 大肠杆菌 Red同源重组 P1噬菌体 基因敲除 脂肪酸含量 |
| 收稿时间： | 2012/11/9 0:00:00 |
| 修稿时间： | 2013/1/28 0:00:00 |
Construction of Escherichia coli gene knock-out mutants for engineering of fatty acid metabolism |
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| Jingqiu Qu,Cuihua Liu,Weifeng Liu,Yong Tao and Kun Zhu.Construction of Escherichia coli gene knock-out mutants for engineering of fatty acid metabolism[J].Acta Microbiologica Sinica,2013,53(6):608-614. |
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| Authors: | Jingqiu Qu Cuihua Liu Weifeng Liu Yong Tao and Kun Zhu |
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| Institution: | * Institute of Microbiology Chinese Academy of Sciences,Beijing 100190,China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Escherichia coli Red homology recombination P1 phage gene knock-out fatty acid content |
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