| 琼胶酶AgaD在大肠杆菌中的高效表达 |
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| 引用本文： | 刘欢,张伟宾,刘丹,于文功,路新枝.琼胶酶AgaD在大肠杆菌中的高效表达[J].微生物学报,2015,55(9):1171-1176. |
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| 作者姓名： | 刘欢 张伟宾 刘丹 于文功 路新枝 |
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| 作者单位： | 中国海洋大学医药学院，海洋药物教育部重点实验室，山东省糖科学与糖工程重点实验室，山东青岛266003,中国海洋大学医药学院，海洋药物教育部重点实验室，山东省糖科学与糖工程重点实验室，山东青岛266003,中国海洋大学医药学院，海洋药物教育部重点实验室，山东省糖科学与糖工程重点实验室，山东青岛266003,中国海洋大学医药学院，海洋药物教育部重点实验室，山东省糖科学与糖工程重点实验室，山东青岛266003,中国海洋大学医药学院，海洋药物教育部重点实验室，山东省糖科学与糖工程重点实验室，山东青岛266003 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金(41376144);国家科技支撑计划(N2013BAB01B02);海洋公益性行业科研专项(201105027，201005024) |
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| 摘 要： | 摘要:【目的】构建琼胶酶AgaD的高效表达体系，优化发酵条件提高重组酶的表达量。【方法】首先根据大肠杆菌(E.coli)密码子偏好性，优化并合成AgaD的基因，使其适合E.coli表达系统;考察了不同的E.coli表达宿主;根据N端法则构建了突变体;评价了培养基中添加CaCl2和甘氨酸(Gly)对重组酶表达的影响。【结果】成功构建了琼胶酶AgaD 的高效表达体系，确定了E.coli AD494(DE3)为最适表达宿主;利用N端法则提高了重组酶的稳定性，缩短了发酵时间;通过在培养基中添加CaCl2和甘氨酸(Gly)进一步提高了胞外酶产量。最终，发酵上清中重组酶的活力由20 U/L提高至11300 U/L，比优化前提高了500余倍。【结论】构建了琼胶酶AgaD的高效表达体系，为GH96家族琼胶酶的深入研究奠定了基础。
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| 关 键 词： | 关键词:琼胶酶，密码子优化，N-端法则，重组表达 |
| 收稿时间： | 2014/12/3 0:00:00 |
| 修稿时间： | 1/5/2015 12:00:00 AM |
High expression of agarase AgaD in Escherichia coli |
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| Huan Liu,Weibin Zhang,Dan Liu,Wengong Yu and Xinzhi Lu.High expression of agarase AgaD in Escherichia coli[J].Acta Microbiologica Sinica,2015,55(9):1171-1176. |
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| Authors: | Huan Liu Weibin Zhang Dan Liu Wengong Yu and Xinzhi Lu |
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