| 人谷胱甘肽硫转移酶A1在乳酸乳球菌中的表达及活性研究 |
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| 引用本文： | 向华,张亦清,卫文仲,谭华荣.人谷胱甘肽硫转移酶A1在乳酸乳球菌中的表达及活性研究[J].微生物学报,2000,40(2):132-138. |
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| 作者姓名： | 向华 张亦清 卫文仲 谭华荣 |
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| 作者单位： | 中国科学院微生物研究所,北京,100080 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金(39800080)和微生物资源国家重点实验室项目资助 |
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| 摘 要： | 用RTPCR技术从人肝总RNA中分离扩增了人谷胱甘肽硫转移酶A1基因的cDNA序列,克隆至大肠杆菌表达质粒pET23b,采用蛋白表达筛查法及DNA测序证明该cDNA序列完全正确。重组质粒pET23bhgst转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导获得高效表达的可溶性hGSTA1产物,其表达量约为大肠杆菌可溶性总蛋白的40%。将hGSTA1cDNA亚克隆至乳酸乳球菌表达载体pMG36e,电穿孔法转化乳酸乳球菌MG1363获得hGSTA1乳酸乳球菌表达株。SDSPAGE及Western杂交分析表明该菌株表达预期大小的hGSTA1融合蛋白,经谷胱甘肽琼脂糖亲和层析纯化获得的hGSTA1蛋白具有较高的谷胱甘肽硫转移酶活性。具hGSTA1酶活性的乳酸乳球菌工程菌可望应用于研制防癌保健乳制品。
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| 关 键 词： | 谷胱甘肽硫转移酶 基因克隆表达 乳酸乳球菌 |
| 文章编号： | 0001-6209(2000)02-0132-38 |
| 修稿时间： | 1998-12-24 |
EXPRESSION AND ACTIVITY ANALYSIS OF THE HUMAN GLUTATHIONE-S-TRANSFERASE IN LACTOCOCCUS LACTIS |
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| Xiang Hua,Xhang Yiqing,Wei Wenzhong,Tan Huarong.EXPRESSION AND ACTIVITY ANALYSIS OF THE HUMAN GLUTATHIONE-S-TRANSFERASE IN LACTOCOCCUS LACTIS[J].Acta Microbiologica Sinica,2000,40(2):132-138. |
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| Authors: | Xiang Hua Xhang Yiqing Wei Wenzhong Tan Huarong |
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| Institution: | Xiang Hua
,Xhang Yiqing
,Wei Wenzhong
,Tan Huarong
;(Institute of Microbiology, Chinese Academy of Sciences, Beijing 100080) |
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| Abstract: | Theglutathione S transferaseA1cDNAwasamplifiedfromhumanlivertotal RNAsbyRT PCRandwasclonedintoaEscherichiacoliexpressionvectorpET2 3b ,then therecombinantplasmidpET2 3bhgstwasintroducedintoE .coliBL2 1 (DE3)andinduced byIPTG ,thehigh levelexpressionofhGSTA1appearedintheE .colicells.ThecDNAen codinghGSTA1wassubclonedintopMG36e,alactococcalexpressionvector,andintroduced intoLactococcuslactisMG1 36 3byelectroporation .Inthepositivetransformants,thehGS TA1wasexpressedasafusionproteinwhichwasverifiedbySDS PAGEandWesternblot. ThehGSTA1frombothE .coliandL .lactiswaspurifiedbyaffinitychromatographyon glutathione agaroseandallshowedenzymaticactivity .Thepotentialapplicationofthere combinantLactococcuslactisinfunctionalfoodwasalsodisscussed . |
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| Keywords: | Glutathione-S-transferase Gene cloning and expression Lactococcus lactis |
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