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| 金针菇漆酶基因的克隆及其在毕赤酵母中的表达研究 | |
| 引用本文： | 张银波,姜琼,江木兰,马立新.金针菇漆酶基因的克隆及其在毕赤酵母中的表达研究[J].微生物学报,2004,44(6):775-779. |
| 作者姓名： | 张银波 姜琼 江木兰 马立新 |
| 作者单位： | 1. 湖北大学,分子微生物学与基因工程研究室,武汉,430062;中国农业科学院油料作物研究所,农业部油料作物遗传改良重点开放实验室,武汉,430062 2. 湖北大学,分子微生物学与基因工程研究室,武汉,430062 3. 中国农业科学院油料作物研究所,农业部油料作物遗传改良重点开放实验室,武汉,430062 |
| 基金项目： | 国家"863计划"(2001AA214161;2002AA227011) |
| 摘 要： | 综合运用cDNA末端快速扩增 (RapidAmplificationofcDNAEnds ,RACE )和基因组步行等技术克隆到一个金针菇 (Flammulinavelutipes)的漆酶结构基因和其对应的全长cDNA ,经测序和BLAST比对分析表明该基因属于多铜氧化酶基因家族 ,与已发表的漆酶基因 (AF176 2 30 )的同源性最高 ,在氨基酸水平为 72 %。该结构基因命名为gl ccFv,cDNA命名为lccFv ,其序列提交GenBank ,登录号分别为AY4 85 82 6和AY4 5 0 4 0 6。将lccFv的开放阅读框克隆到毕赤酵母表达载体pHBM90 6 ,转化毕赤酵母GS115且实现了分泌表达。将重组毕赤酵母GS115 (pHBM5 6 5 )诱导产酶 ,在培养温度 2 0℃、甲醇流加量为 1 0 % (V V)的情况下 ,其分泌表达的LCCFv的最高酶活为 0 10 70U mL ,最适反应温度为 4 5℃ ,最适反应pH值为 3 9,在最适反应条件下其热稳定性和pH值稳定性均较好 |
| 关 键 词： | cDNA末端快速扩增 基因组步行 漆酶基因 毕赤酵母 分泌表达 |
| 文章编号： | 0001-6209(2004)06-0775-05 |
| 修稿时间： | 2004年4月23日 |
Cloning of A Laccase Gene from Flammulina velutipes and Study on Its Expression in Pichia pastoris |
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| Yin-Bo Zhang,Qiong Jiang,Mu-Lan Jiang,Li-Xin Ma.Cloning of A Laccase Gene from Flammulina velutipes and Study on Its Expression in Pichia pastoris[J].Acta Microbiologica Sinica,2004,44(6):775-779. | |
| Authors: | Yin-Bo Zhang Qiong Jiang Mu-Lan Jiang Li-Xin Ma |
| Institution: | Molecular Microbiology Lab, Hubei University, Hubei 430062, China. ybzhang04@yahoo.com |
| Abstract: | |
| Keywords: | Laccase gene RT-PCR Pichia pastoris |
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