| Intein介导的重组昆虫毒素BmK IT在大肠杆菌中的可溶性表达、纯化及活性分析 |
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| 引用本文： | 许成钢,范晓军,张志云,付月君,梁爱华.Intein介导的重组昆虫毒素BmK IT在大肠杆菌中的可溶性表达、纯化及活性分析[J].微生物学报,2007,23(6). |
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| 作者姓名： | 许成钢 范晓军 张志云 付月君 梁爱华 |
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| 作者单位： | 山西大学生物技术研究所，化学生物学与分子工程教育部重点实验室，太原 030006;山西大学生物技术研究所，化学生物学与分子工程教育部重点实验室，太原 030006;山西大学生物技术研究所，化学生物学与分子工程教育部重点实验室，太原 030006;山西大学生物技术研究所，化学生物学与分子工程教育部重点实验室，太原 030006;山西大学生物技术研究所，化学生物学与分子工程教育部重点实验室，太原 030006 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目(Nos. 30700534, 30670282 and 30470239)、山西省自然科学基金项目资助(Nos. 20051065 and 20041033)。 |
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| 摘 要： | 为获得重组蝎昆虫毒素BmK IT，通过PCR方法在BmK IT基因的3′端融合了编码6个组氨酸残基的核苷酸序列，将其插入原核表达载体pTWIN1的内含肽 Ssp DnaB Intein基因下游的多克隆位点（MCS）。将获得的表达质粒转化大肠杆菌BL21（DE3）中，用IPTG诱导融合蛋白表达。用Ni-NTA亲和层析柱从菌体裂解液中纯化了CBD-Intein-BmK IThis6融合蛋白，并在柱上诱导Intein自剪切，成功去除融合子CBD-Intein。通过Superdex 75凝胶过滤层析获得了纯度达95%以上的BmK IThis6蛋白，该蛋白不仅具有正确的二级结构而且有生物活性。
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| 关 键 词： | 东亚钳蝎昆虫毒素， 原核表达， Intein自剪切， 虫试实验 |
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