| 过表达pps基因和aroG~(fbr)基因对北京棒杆菌L-色氨酸合成的影响 |
| |
| 引用本文： | 臧传刚,赵智,王宇,张英姿,丁久元.过表达pps基因和aroG~(fbr)基因对北京棒杆菌L-色氨酸合成的影响[J].微生物学报,2014,54(1):24-32. |
| |
| 作者姓名： | 臧传刚 赵智 王宇 张英姿 丁久元 |
| |
| 作者单位： | 中国科学院微生物研究所，北京100101;中国科学院微生物研究所，北京100101;中国科学院微生物研究所，北京100101;中国科学院微生物研究所，北京100101;中国科学院微生物研究所，北京100101 |
| |
| 摘 要： | 【目的】通过增加北京棒杆菌(Corynebacterium pekinense)PD-67芳香族氨基酸合成的前体物质磷酸烯醇式丙酮酸(PEP)的供应,解除终产物对芳香族氨基酸合成途径中第一个酶同时也是关键酶3-脱氧-D-阿拉伯庚酮糖-7-磷酸合酶(DS)的反馈抑制并提高抗反馈抑制的DS的活力,使碳流更多地流向芳香族氨基酸合成途径,从而积累更多L-色氨酸。【方法】运用PCR技术扩增北京棒杆菌PD-67磷酸烯醇式丙酮酸合酶基因pps,与表达载体连接构建重组质粒pXPS;运用重叠PCR技术定点突变大肠杆菌(Escherichia coli)受苯丙氨酸调控的DS基因aroG,使相应的编码氨基酸序列发生突变:Leu175Asp,新的基因命名为aroGfbr,与表达载体连接构建重组质粒pXA;构建pps和aroGfbr的共表达重组质粒pXAPS。将3个重组质粒分别转入菌株PD-67,构建工程菌株PD-67/pXPS、PD-67/pXA和PD-67/pXAPS。通过摇瓶发酵研究工程菌株的发酵特性。【结果】酶活分析结果表明,pps基因和aroGfbr基因在北京棒杆菌PD-67中均实现了表达。工程菌株PD-67/pXA粗酶液DS抗反馈抑制分析表明,AroGfbr已解除酪氨酸和苯丙氨酸的反馈抑制。过表达pps基因和aroGfbr基因分别使工程菌L-色氨酸产量提高12.1%和26.8%,双基因共表达可使工程菌的产酸量提高35.9%。【结论】北京棒杆菌PD-67pps基因的过表达以及大肠杆菌来源的解除反馈抑制的aroGfbr的过表达均有助于增加PD-67 L-色氨酸的合成,而双基因的共表达可以进一步提高L-色氨酸的积累量。
|
| 关 键 词： | 北京棒杆菌 磷酸烯醇式丙酮酸合酶 -脱氧-D-阿拉伯庚酮糖--磷酸合酶 反馈抑制 过表达 L-色氨酸 |
| 收稿时间： | 5/2/2013 12:00:00 AM |
| 修稿时间： | 6/9/2013 12:00:00 AM |
Effect of pps and aroGfbr overexpression on L-tryptophan production in Corynebacterium pekinense |
| |
| Chuangang Zang,Zhi Zhao,Yu Wang,Yingzi Zhang and Jiuyuan Ding.Effect of pps and aroGfbr overexpression on L-tryptophan production in Corynebacterium pekinense[J].Acta Microbiologica Sinica,2014,54(1):24-32. |
| |
| Authors: | Chuangang Zang Zhi Zhao Yu Wang Yingzi Zhang and Jiuyuan Ding |
| |
| Institution: | Chuangang Zang;Zhi Zhao;Yu Wang;Yingzi Zhang;Jiuyuan Ding;Institute of Microbiology,Chinese Academy of Sciences;Graduate School of the University of Chinese Academy of Sciences; |
| |
| Abstract: | |
| |
| Keywords: | |
| 本文献已被 CNKI 等数据库收录！ |
| 点击此处可从《微生物学报》浏览原始摘要信息 |
| 点击此处可从《微生物学报》下载免费的PDF全文 |
|
