| 芽胞外壁基质组成蛋白的编码基因启动子PexsY指导的cry1Ac基因表达 |
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| 引用本文： | 郑庆云,王冠男,张喆,曲宁,彭琦,张杰,高继国,宋福平.芽胞外壁基质组成蛋白的编码基因启动子PexsY指导的cry1Ac基因表达[J].微生物学报,2014,54(10):1138-1145. |
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| 作者姓名： | 郑庆云 王冠男 张喆 曲宁 彭琦 张杰 高继国 宋福平 |
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| 作者单位： | 东北农业大学生命科学学院，黑龙江哈尔滨150030;中国农业科学院植物保护研究所，植物病虫害生物学国家重点实验室，北京100193;中国农业科学院植物保护研究所，植物病虫害生物学国家重点实验室，北京100193;东北农业大学生命科学学院，黑龙江哈尔滨150030;中国农业科学院植物保护研究所，植物病虫害生物学国家重点实验室，北京100193;中国农业科学院植物保护研究所，植物病虫害生物学国家重点实验室，北京100193;东北农业大学生命科学学院，黑龙江哈尔滨150030;中国农业科学院植物保护研究所，植物病虫害生物学国家重点实验室，北京100193 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金(31270111);国家“863 计划”(2011AA10A203) |
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| 摘 要： | 【目的】利用非cry基因启动子PexsY(芽胞外壁基质组成蛋白编码基因启动子)表达Cry1Ac晶体蛋白,发现可用于cry基因表达的新元件,为高效工程菌的构建奠定基础。【方法】采用启动子融合lacZ技术,通过β-半乳糖苷酶活性分析了PexsY启动子和截短的PexsY启动子的转录活性;利用该启动子在苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)HD73菌株中表达了cry1Ac基因,通过透射电子显微镜观察晶体形态;蛋白定量、SDS-PAGE比较蛋白产量;生物活性测定进行功能验证。【结果】PexsY启动子在芽胞晚期转录活性很高,透射电镜观察到利用该启动子表达的cry1Ac基因形成了菱形晶体,SDS-PAGE分析可以检测到133kDa的Cry1Ac蛋白,且与cry3A启动子指导表达的蛋白产量相近,少于cry8E启动子指导表达的蛋白产量;生物活性测定表明PexsY指导表达Cry1Ac蛋白对玉米螟(Ostrinia furnacalis)具有杀虫活性。【结论】在Bt无晶体突变体中,非cry基因启动子PexsY可以正常表达133kDa的Cry1Ac蛋白,并形成晶体,具有在芽胞形成晚期表达cry基因的能力,该类启动子将在Bt工程菌构建中发挥重要作用。
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| 关 键 词： | 苏云金芽胞杆菌 PexsY启动子 CryAc蛋白 |
| 收稿时间： | 2013/12/31 0:00:00 |
| 修稿时间： | 2014/2/17 0:00:00 |
Expression of cry1Ac gene directed by PexsYpromoter of the exsY gene encoding component protein of exosporium basal layer in Bacillus thuringiensis |
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| Qingyun Zheng,Guannan Wang,Zhe Zhang,Ning Qu,Qi Peng,Jie Zhang,Jiguo Gao and Fuping Song.Expression of cry1Ac gene directed by PexsYpromoter of the exsY gene encoding component protein of exosporium basal layer in Bacillus thuringiensis[J].Acta Microbiologica Sinica,2014,54(10):1138-1145. |
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| Authors: | Qingyun Zheng Guannan Wang Zhe Zhang Ning Qu Qi Peng Jie Zhang Jiguo Gao and Fuping Song |
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