| 力复霉素产生菌地中海拟无枝菌酸菌U32丙氨酸脱氢酶基因克隆及表达 |
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| 引用本文： | 姚玉峰,卢捷,俞浩,赵国屏,姜卫红,焦瑞身.力复霉素产生菌地中海拟无枝菌酸菌U32丙氨酸脱氢酶基因克隆及表达[J].微生物学报,2003,43(2):206-213. |
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| 作者姓名： | 姚玉峰 卢捷 俞浩 赵国屏 姜卫红 焦瑞身 |
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| 作者单位： | 中国科学院上海植物生理生态研究所微生物次生代谢分子调控研究实验室,上海,200032 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金重点项目资助 (1 0 0 3 963 0 0 1 0 )~~ |
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| 摘 要： | 丙氨酸脱氢酶(EC1411)可逆催化丙氨酸脱氨生成丙酮酸和NADH。它是生物体内的氨基酸代谢和氨同化途径的关键酶。在地中海拟无枝菌酸菌(Amycolatopsis mediterranei)U32中，丙氨酸脱氢酶的活力与力复霉素的生物合成有负相关现象，其活力受KNO3全局效应的调控。根据结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)和天蓝链霉菌(Streptomyces coelicolor)的丙氨酸脱氢酶氨基酸的保守序列和地中海拟无枝菌酸菌U32对氨基酸密码子的使用偏好，设计一对简并PCR引物。以此引物从地中海拟无枝菌酸菌U32中扩增到一555bp的片段，并以此片段为探针从地中海拟无枝菌酸菌U32 基因组cosmid文库中成功的克隆到了丙氨酸脱氢酶结构基因(ald)。它编码了一个371个氨基酸的蛋白质，基因的GC含量为72.5％，符合链霉菌的基因结构特征。在起始密码子的上游6个碱基处，有一典型的链霉菌核糖体结合位点(RBS)：AGGAGG，第75位的氨基酸为赖氨酸，是丙酮酸结合位点。以pET28b为载体，在E.coli BL21(DE3)中高效表达了ald基因。用IPTG在22℃时诱导得到的丙氨酸脱氢酶活力最高。用HisTag柱纯化了表达的丙氨酸脱氢酶。酶学性质研究表明该酶专一性以LAla和NAD(H)为底物。
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| 关 键 词： | 地中海拟无枝菌酸菌，丙氨酸脱氢酶，克隆，表达 |
| 文章编号： | 0001-6179(2003)02-0206-08 |
Cloning and Characterization of Alanine Dehydrogenase Gene(ald) from Amycolatopsis mediterranei U32 |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Amycolatopsis mediterranei Alanine dehydrogenase Cloning Expression |
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