乙型肝炎病毒表面抗原基因在杆状病毒载体与昆虫细胞体系中的表达

根据杆状病毒A组代表种苜蓿Y纹夜蛾核多角体病毒(Autographa californica Nuclear Po-lyhedrosis Virus,简称AcNPV)的分子生物学资料，我们采用分子剪裁和拼接手段，对AcNPV多角体蛋白基因加以修饰，并用人工合成定位探针，获得大约在该基因的ATG转译起始密码子一9处加有合成BamHl连接序列的转移载体质粒pAc—MV。 再与从乙肝病毒adw亚型的表面抗原基因HBng亚克隆株pYPss一1分出带有Ban·Hl粘性末端的HBsAg基因，构建表达载体质粒pAc—MV—HBsAgo经与野生型AcNPV DNA对Spodoptem 7rugJPerda细胞共转染，借助同源交换，获得插有HBsAg基因的多角体缺陷的重组病毒。根据HBsAg诊断血球凝集试验和HBs^g诊断酶标免疫测定，表明重组病毒使HBsAg基因在昆虫细胞中得到了表达，免疫电镜显示表达产物呈球状颗粒，大小约为22nm。表达产物粗制品按1μg／鼠对bal b／c鼠免疫，并于三周后强化免疫能产生抗体。由HBsAg纯样品酶标免疫法标定的标准曲线估计每升培养物的表达产物约{一8mg，细胞量为1一2×106个/ml.用重组病毒感染玉米螟4龄幼虫，也获得HBsAg基因的表达，展示了简易生产HB sag诊断试剂和疫苗的可喜前景。