QsvR对副溶血弧菌VI型分泌系统1相关基因的转录调控

【目的】研究调控蛋白QsvR对副溶血弧菌VI型分泌系统1 （type VI secretion system 1，T6SS1）相关基因的转录调控关系。【方法】提取野生株（wild type，WT）和qsvR突变株（ΔqsvR）的总RNA，采用实时定量PCR （quantitative real-time PCR，qPCR）研究QsvR对靶基因的调控关系；进而采用引物延伸法定位靶基因的转录起始位点和核心启动子区，并根据引物延伸产物丰度判断QsvR对靶基因的调控关系；将靶基因的调控区DNA序列克隆入pHRP309质粒中的β-半乳糖苷酶基因上游（LacZ重组质粒），并将重组质粒转化入WT和ΔqsvR中，通过LacZ报告基因融合试验研究QsvR对靶基因的调控关系；将LacZ重组质粒分别转化入含有pBAD33或pBAD33-qsvR的大肠杆菌100lpir中，进一步采用LacZ报告基因融合试验研究在异体宿主中QsvR对靶基因的调控关系；PCR扩增靶基因调控区DNA序列，同时表达并纯化His-QsvR重组蛋白，采用凝胶阻滞试验（electrophoresis mobility shift assay，EMSA）研究His-QsvR对靶基因调控区DNA序列是否具有直接的结合作用。【结果】qPCR结果显示，与WT相比，ΔqsvR中T6SS1相关基因VP1388 （操纵子VP1388-1390首基因）和hcp1 （操纵子VP1393-1406首基因）的转录水平显著性升高，表明QsvR抑制VP1388和hcp1的转录；引物延伸结果显示VP1388和hcp1各有一个转录起始位点，分别为C （-64）和T （-62），且它们的转录活性受QsvR的抑制；LacZ报告基因融合试验结果显示QsvR可以抑制副溶血弧菌和EC100lpir中VP1388和hcp1的启动子区转录活性；EMSA结果显示His-QsvR对VP1388和hcp1的启动子区DNA序列具有直接的结合活性。【结论】QsvR对T6SS1相关操纵子VP1388-1390和VP1393-1406的转录具有直接的抑制作用。