| 深海沉积物微生物元基因组文库来源的新的酯酶基因的克隆、表达及酶学性质 |
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| 引用本文： | 徐士庆,胡永飞,袁爱花,朱宝利.深海沉积物微生物元基因组文库来源的新的酯酶基因的克隆、表达及酶学性质[J].微生物学报,2010,50(7):891-896. |
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| 作者姓名： | 徐士庆 胡永飞 袁爱花 朱宝利 |
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| 作者单位： | 中国科学院微生物研究所,中国科学院病原微生物与免疫学重点实验室,北京,100101 |
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| 基金项目： | 国家“863计划”（2007AA09Z443，2007AA021301）；中国科学院知识创新工程项目（KSCX2-YW-G-022）；国家自然科学基金(30770060) |
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| 摘 要： | 【目的】从深海沉积物微生物元基因组文库中克隆新的酯酶基因,并进行酶学性质研究。【方法】利用含有三丁酸甘油酯的酯酶选择性筛选培养基,从深海沉积物微生物元基因组文库中筛选得到酯酶阳性Fosmid克隆。对筛选得到的fosmid FL10进行部分酶切构建亚克隆文库,筛选得到酯酶阳性亚克隆pFLS10。PCR扩增目的片段后与pET28a连接构建酯酶基因原核表达质粒,转化大肠杆菌(Escherichia coli)BL21。纯化表达产物并对其进行活性测定及酶学性质研究。【结果】序列分析显示该pFLS10亚克隆质粒含有一段924bp的ORF(Open Reading Frame),与一海洋元基因组文库中筛选出的酯酶ADA70030序列一致性为71%。该酶为一新的低温酯酶,对C4底物(对硝基苯丁酸酯)水解能力最强。该酶最适作用温度为20℃,最适作用pH为7.5,20℃时较为稳定,pH8-10的范围内有良好的pH稳定性,K+、Mg2+对该酶具有一定的激活作用,Mn2+等对其具有不同程度的抑制作用。【结论】应用元基因组技术筛选到了新的酯酶基因fls10并进行了克隆表达,该酶在低温及碱性条件下较为稳定且活力较高,对于工业化生产具有一定的应用潜力。关键词:深海沉积物;元基因组文库;低温酯酶;酶学特征
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| 关 键 词： | 关键词: 深海沉积物 元基因组文库 低温酯酶 酶学特征 |
| 收稿时间： | 3/5/2010 12:00:00 AM |
| 修稿时间： | 2010/4/14 0:00:00 |
Cloning, expression and characterization of a novel esterase from marine sediment microbial metagenomic library |
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| Shiqing Xu,Yongfei Hu,Aihua Yuan and Baoli Zhu.Cloning, expression and characterization of a novel esterase from marine sediment microbial metagenomic library[J].Acta Microbiologica Sinica,2010,50(7):891-896. |
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| Authors: | Shiqing Xu Yongfei Hu Aihua Yuan and Baoli Zhu |
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| Institution: | Key Laboratory of Pathogenic Microbiology and Immunology, Institute of Microbiology, Chinese Academy of Sciences, Beijing 100101, China;Key Laboratory of Pathogenic Microbiology and Immunology, Institute of Microbiology, Chinese Academy of Sciences, Beijing 100101, China;Key Laboratory of Pathogenic Microbiology and Immunology, Institute of Microbiology, Chinese Academy of Sciences, Beijing 100101, China;Key Laboratory of Pathogenic Microbiology and Immunology, Institute of Microbiology, Chinese Academy of Sciences, Beijing 100101, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Keywords: marine sediment metagenomic library low-temperature-active esterase characterization of esterase |
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