建立以TK基因为标记将外源基因导人臭曲霉(Aspergillus foetidus)的选择系统及外源基因的表达

本文报道建立以胸腺嘧啶核苷激酶(TK)为标记，利用痘苗病毒TK基因为旁侧序列的外源基因载体，通过体内同源重组的原理将外源基因导入臭曲霉菌，并用5-溴脱氧尿嘧啶核膏(BudR)进行转化株选择的新系统，对黑曲霉菌TK+株的挑选、转化及选择条件等进行了研究。用这一系统，成功地将臭曲霉菌自身分离到的启动基因H8驱动下的乙肝表面抗原(HB8sAg)基因导入臭曲霉菌。Southern blot和多次孢子传代证实，HBsAg基因已与宿主的DNA稳定整合：在发酵上清液中，ELIAS检测HBsAg为阳性(P/N值在20左右)，wwstern blot有特异的带存在，免疫电镜观察发现，在发酵液中存在有与人血清中HBssAg颗粒大小、形态相似的22nm的颗粒。这些结果表明，HBAg基因在臭曲霉菌中已获表达。本文建立的基因导入和选择系统可广泛应用于各种外源基因在臭曲霉菌中表达的研究。