| 鲤疱疹病毒II型ORF25B编码蛋白诱饵载体的构建及其互作蛋白的筛选 |
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| 引用本文： | 聂细荣,薛明洋,林格,李逸群,范玉顶,刘文枝,孟彦,江南,曾令兵,周勇.鲤疱疹病毒II型ORF25B编码蛋白诱饵载体的构建及其互作蛋白的筛选[J].微生物学报,2021,61(10):3103-3113. |
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| 作者姓名： | 聂细荣 薛明洋 林格 李逸群 范玉顶 刘文枝 孟彦 江南 曾令兵 周勇 |
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| 作者单位： | 上海海洋大学水产与生命学院, 上海 201306;中国水产科学研究院长江水产研究所, 湖北 武汉 430223 |
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| 基金项目： | 国家重点研发计划（2019YFD0900105）；国家自然科学基金（31802346）；国家大宗淡水鱼类产业技术体系建设专项资金（CARS-45-16）；湖北省技术创新专项（2018ABA101） |
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| 摘 要： | 【目的】鲤疱疹病毒Ⅱ型(Cyprinid herpesvirus 2,CyHV-2)感染养殖鲫引起的鲫造血器官坏死病,给鲫养殖业造成了重大的经济损失。揭示CyHV-2感染宿主细胞的机制,是建立鲫造血器官坏死病有效防治技术的重要基础。【方法】本研究针对CyHV-2富含抗原表位的ORF25B区域设计引物,扩增ORF25B基因截短序列。将扩增产物克隆至酵母双杂交诱饵载体pGBKT7,构建诱饵载体pGBKT7-tORF25B,转化至酵母菌株Y2HGold中。在营养缺陷型培养基上,验证诱饵表达载体pGBKT7-tORF25B对酵母菌Y2HGold自激活现象和毒性作用。利用酵母双杂交技术,将诱饵菌株pGBKT7-tORF25B/Y2HGold与鲫脑组织细胞系(GiCB)cDNA文库杂交。【结果】ORF25B基因截短序列扩增大小约为981 bp,成功构建了诱饵菌株pGBKT7-tORF25B/Y2H Gold,自激活和毒性验证结果表明,诱饵表达载体对酵母菌株无自激活现象,也无毒性作用,初步筛选出4种与tORF25B基因编码蛋白互作的宿主蛋白。【结论】本研究结果为深入开展CyHV-2 ORF25B编码蛋白功能及病毒入侵宿主细胞的机制研究奠定了重要基础。
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| 关 键 词： | 鲤疱疹病毒II型 ORF25B基因 酵母双杂交 诱饵载体 互作蛋白 |
| 收稿时间： | 2020/12/2 0:00:00 |
| 修稿时间： | 2021/1/9 0:00:00 |
Construction of a bait vector and preliminary screening of host proteins interacting with Cyprinid herpesvirus 2 ORF25B using yeast two hybrid system |
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| Xirong Nie,Mingyang Xue,Ge Lin,Yiqun Li,Yuding Fan,Wenzhi Liu,Yan Meng,Nan Jiang,Lingbing Zeng,Yong Zhou.Construction of a bait vector and preliminary screening of host proteins interacting with Cyprinid herpesvirus 2 ORF25B using yeast two hybrid system[J].Acta Microbiologica Sinica,2021,61(10):3103-3113. |
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| Authors: | Xirong Nie Mingyang Xue Ge Lin Yiqun Li Yuding Fan Wenzhi Liu Yan Meng Nan Jiang Lingbing Zeng Yong Zhou |
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| Institution: | College of Fisheries and Life Sciences, Shanghai Ocean University, Shanghai 201306, China;Yangtze River Fisheries Research Institute, Chinese Academy of Fishery Science, Wuhan 430223, Hubei Province, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Cyprinid herpesvirus 2 ORF25B gene yeast two hybrid bait vector interacted protein |
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