| 荧光扫描法快速检测肽核酸分子信标标记的单增李斯特菌北大核心CSCD |
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| 引用本文： | 吴姗,张晓峰,帅江冰,李可,虞惠贞,金晨晨.荧光扫描法快速检测肽核酸分子信标标记的单增李斯特菌北大核心CSCD[J].微生物学报,2016,56(7):1105-1112. |
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| 作者姓名： | 吴姗 张晓峰 帅江冰 李可 虞惠贞 金晨晨 |
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| 作者单位： | 浙江省检验检疫科学技术研究院, 浙江 杭州 310016,浙江省检验检疫科学技术研究院, 浙江 杭州 310016,浙江省检验检疫科学技术研究院, 浙江 杭州 310016,浙江省检验检疫科学技术研究院, 浙江 杭州 310016,浙江省检验检疫科学技术研究院, 浙江 杭州 310016,浙江省检验检疫科学技术研究院, 浙江 杭州 310016 |
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| 基金项目： | 国家质量监督检验检疫总局科研项目(2013IK189,2015IK301);浙江省公益技术应用研究计划项目(2015C33042) |
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| 摘 要： | 【目的】建立了单核细胞增多性李斯特菌(Listeria monocytogenes,单增李斯特菌)的肽核酸(Peptide nucleic acid,PNA)分子信标(Molecular beacon)的荧光扫描检测方法,以简化普通PNA原位荧光杂交(Fluorescence in situ hybridization,FISH)检测方法中显微镜观察步骤。【方法】在具有单增李斯特菌特异性的肽核酸探针的5′和3′分别标记报告荧光基团和淬灭基团形成分子信标PNA探针,利用FISH技术和荧光扫描技术对单增李斯特菌进行检测。【结果】用普通PNA探针进行荧光扫描检测时,以N1处理为空白对照,假阳性率11.4%,假阴性率为0;以N2处理为空白时,假阳性率降低至4.3%,但假阴性率上升为18.6%。用分子信标PNA探针进行检测时,用N1为空白对照时,假阳性率8.6%,假阴性率为1.4%;以N2处理作为空白时,假阳性率5.7%,假阴性率为1.4%。与普通探针比较,分子信标PNA探针能有效减少假阳性和假阴性的发生。2种普通PNA探针的杂交成功率分别为83.3%和95.2%;2种"分子信标化"的肽核酸探针的成功率分别为91.7%和90.5%,表明探针两端标记并不会降低与目标菌的杂交成功率。【结论】将液相PNA-FISH和荧光扫描技术结合,通过大通量快速的荧光扫描检测可大幅提高检测效率。同时将肽核酸探针分子信标化,有效的降低了荧光扫描结果的假阳性,并通过了N1和N2两种空白对照处理把假阴性控制在较低的范围。
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| 关 键 词： | 肽核酸荧光原位杂交 分子信标 荧光扫描 单增李斯特菌 |
| 收稿时间： | 2015/9/21 0:00:00 |
| 修稿时间： | 2/3/2016 12:00:00 AM |
Molecular beacon based PNA-FISH method combined with fluorescence scanning for rapid detection of Listeria monocytogenes |
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| Shan Wu,Xiaofeng Zhang,Jiangbing Shuai,Ke Li,Huizhen Yu and Chenchen Jin.Molecular beacon based PNA-FISH method combined with fluorescence scanning for rapid detection of Listeria monocytogenes[J].Acta Microbiologica Sinica,2016,56(7):1105-1112. |
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| Authors: | Shan Wu Xiaofeng Zhang Jiangbing Shuai Ke Li Huizhen Yu and Chenchen Jin |
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| Institution: | Zhejiang Academy of Science and Technology for Inspection and Quarantine, Hangzhou 310016, Zhejiang Province, China,Zhejiang Academy of Science and Technology for Inspection and Quarantine, Hangzhou 310016, Zhejiang Province, China,Zhejiang Academy of Science and Technology for Inspection and Quarantine, Hangzhou 310016, Zhejiang Province, China,Zhejiang Academy of Science and Technology for Inspection and Quarantine, Hangzhou 310016, Zhejiang Province, China,Zhejiang Academy of Science and Technology for Inspection and Quarantine, Hangzhou 310016, Zhejiang Province, China and Zhejiang Academy of Science and Technology for Inspection and Quarantine, Hangzhou 310016, Zhejiang Province, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | PNA-FISH molecular beacon fluorescence scanning Listeria monocytogenes |
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