| 悬浮培养HEK-293 N3S细胞生产重组腺病毒Ad-GFP的实验研究 |
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| 引用本文： | 田博,吴彬,张群伟,毕建进,王澜,朱宝珍,耿越,吴祖泽.悬浮培养HEK-293 N3S细胞生产重组腺病毒Ad-GFP的实验研究[J].微生物学报,2007,23(5). |
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| 作者姓名： | 田博 吴彬 张群伟 毕建进 王澜 朱宝珍 耿越 吴祖泽 |
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| 作者单位： | 山东师范大学生命科学学院，济南 250014;军事医学科学院放射与辐射医学研究所实验血液学实验室，北京 100850;军事医学科学院放射与辐射医学研究所实验血液学实验室，北京 100850;军事医学科学院放射与辐射医学研究所实验血液学实验室，北京 100850;军事医学科学院放射与辐射医学研究所实验血液学实验室，北京 100850;军事医学科学院放射与辐射医学研究所实验血液学实验室，北京 100850;山东师范大学生命科学学院，济南 250014;军事医学科学院放射与辐射医学研究所实验血液学实验室，北京 100850 |
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| 基金项目： | 国家高技术研究与发展计划(863计划)项目资助（No.2001AA217041）。 |
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| 摘 要： | 利用5L生物反应器悬浮培养HEK-293 N3S细胞生产携带绿色荧光蛋白基因的重组腺病毒(recombinant adenovirus-green fluorescent protein，Ad-GFP)，为规模化生产腺病毒基因药物建立一种稳定可行的生产工艺。复苏的种子细胞进行逐级放大最后接入5L搅拌式生物反应器中，采用含5％胎牛血清（FBS）的DMEM/F12培基灌流培养293 N3S细胞，当细胞密度达到(2～4)×106个/mL时感染Ad-GFP，48h后收获细胞，经两步氯化铯超速离心获得纯化的Ad-GFP。采用紫外分光光度计比色法和高压液相色谱法（HPLC）测定病毒颗粒数和纯度，采用组织培养半数感染剂量（TCID50）法检测腺病毒的感染滴度。连续培养10～12d，细胞密度可达到(2～4)×1066个/mL左右，纯化的Ad-GFP感染滴度和颗粒数分别为1.0×1011IU/mL和1.68×1012VP/mL，比活性为6.0%，A260A280比值为1.33，产品纯度达到99.2%。建立了5L生物反应器悬浮培养293 N3S细胞生产重组腺病毒Ad-GFP的生产工艺，对携带其他基因的重组腺病毒药物生产具有一定的指导意义。
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| 关 键 词： | 悬浮培养，重组腺病毒，HEK-293 N3S细胞，生物反应器 |
Producing Recombinant Adenovirus Encoding Green Fluorescent Protein (Ad-GFP) by Suspension Cultured HEK-293 N3S Cells |
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| TIAN Bo,WU Bin,ZHANG Qun-Wei,BI Jian-Jin,WANG Lan,ZHU Bao-Zhen,GENG Yue and WU Zu-Ze.Producing Recombinant Adenovirus Encoding Green Fluorescent Protein (Ad-GFP) by Suspension Cultured HEK-293 N3S Cells[J].Acta Microbiologica Sinica,2007,23(5). |
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| Authors: | TIAN Bo WU Bin ZHANG Qun-Wei BI Jian-Jin WANG Lan ZHU Bao-Zhen GENG Yue and WU Zu-Ze |
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| Institution: | Academy of Life Science, Shandong Normal University, Jinan 250014, China;Institute of Radiation Medicine, Academy of Military Medical Science, Beijing 100850, China;Institute of Radiation Medicine, Academy of Military Medical Science, Beijing 100850, China;Institute of Radiation Medicine, Academy of Military Medical Science, Beijing 100850, China;Institute of Radiation Medicine, Academy of Military Medical Science, Beijing 100850, China;Institute of Radiation Medicine, Academy of Military Medical Science, Beijing 100850, China;Academy of Life Science, Shandong Normal University, Jinan 250014, China;Institute of Radiation Medicine, Academy of Military Medical Science, Beijing 100850, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | suspension culture recombinant adenovirus HEK-293 N3S cells bioreactor |
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