探讨屎肠球菌的VanA调控人正常结直肠 黏膜细胞FHC凋亡的机制

摘要：目的 探讨屎肠球菌的万古霉素替考拉宁A型抗性蛋白/D-丙氨酸-D-丙氨酸连接酶（Vancomycin Teicoplanin A-type resistance protein D-alanine-D-alanine ligase，vanA）调控人正常结直肠黏膜细胞FHC凋亡的机制。方法 在人正常结直肠黏膜细胞FHC中使用屎肠球菌感染，Annxin-V染色检测细胞凋亡情况。使用屎肠球菌的VanA蛋白刺激，检测FHC细胞凋亡情况、ROS水平以及ROS标志蛋白MDA、GSH和SOD的表达水平。ROS抑制Acetylcysteine处理VanA刺激的FHC细胞后，检测细胞凋亡相关蛋白的表达水平。结果 屎肠球菌与人正常结直肠黏膜细胞FHC共培养后，人正常结直肠黏膜细胞FHC的凋亡水平明显升高（t=2.876，P=0.045 2），并且VanA蛋白能促进FHC凋亡水平（t=5.579，P=0.005 1），同时细胞凋亡相关蛋白CLEAVED-CAS9、BAK的表达量上升，BCL-2的表达量下降。屎肠球菌的VanA蛋白刺激后，发现正常结直肠黏膜细胞FHC的ROS水平上升（t=10.190，P=0.000 5），ROS标志蛋白MDA（t=4.315，P=0.012 5）和SOD（t=5.751，P=0.004 5）的表达水平上升，GSH（t=5.225，P=0.006 4）的表达水平下降，但是，ROS抑制剂Acetylcysteine能够抑制这种现象。结论 屎肠球菌的VanA通过提高细胞内ROS水平来促进人正常结直肠黏膜细胞FHC凋亡。

Mechanism of VanA of Enterococcus faecium regulating FHC apoptosis in human normal colorectal mucosa cells