| 苏云金芽胞杆菌中荧光分析融合杀虫晶体蛋白的形成 |
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| 引用本文： | 杨慧,融融,宋福平,孙长坡,魏娟,张杰,黄大昉.苏云金芽胞杆菌中荧光分析融合杀虫晶体蛋白的形成[J].中国科学:生命科学,2010,40(8):738-744. |
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| 作者姓名： | 杨慧 融融 宋福平 孙长坡 魏娟 张杰 黄大昉 |
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| 作者单位： | 中国农业科学院植物保护研究所, 病虫害生物学国家重点实验室, 北京 100193;
中国农业科学院生物技术研究所, 北京 100081 |
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| 基金项目： | 国家重点基础研究发展计划(批准号: 2009CB118902)和国家高技术研究发展计划(批准号: 2006AA10A212)资助项目 |
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| 摘 要： | 为研究苏云金芽胞杆菌杀虫晶体蛋白在细胞中的定位及在细胞中的形成, 构建了Cry1Ac-GFP融合蛋白, 大小约为160 kD. 将携带cry1Ac启动子的cry1Ac-gfp融合基因片段克隆到pHT304载体上, 获得融合表达载体pHTcry1Ac-gfp. pHTcry1Ac-gfp转化到无晶体突变株HD-73 cry-中, 获得融合表达菌株HD-73-(pHTcry1Ac-gfp). gfp基因通过同源重组插入到HD-73内源大质粒pHT73上cry1Ac基因的3′端, 获得原位融合表达菌株HD-73Φ(cry1Ac-gfp)3534. 激光共聚焦显微镜和Western杂交分析表明, 不对称隔膜形成时, HD-73-(pHTcry1Ac-gfp)和HD-73Φ(cry1Ac-gfp)3534细胞中检测到Cry1Ac-GFP融合蛋白的表达. 融合蛋白颗粒在细胞中的聚集存在一定的极性, 分布于母细胞不对称隔膜附近. Cry1Ac-GFP和Cry1Ac蛋白对小菜蛾的杀虫活性在95%置信区间内没有明显差异.
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| 关 键 词： | 苏云金芽胞杆菌 Cry1Ac-GFP融合蛋白 激光共聚焦显微镜 |
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