| 氯霉素抗性融合蛋白报告系统的建立与验证 |
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| 引用本文： | 王爱娥,张睢扬,董书魁,梅开城,马建新,王东霞,王英.氯霉素抗性融合蛋白报告系统的建立与验证[J].中国生物工程杂志,2005,25(11):36-41. |
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| 作者姓名： | 王爱娥 张睢扬 董书魁 梅开城 马建新 王东霞 王英 |
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| 作者单位： | 1. 中国人民解放军第二炮兵总医院呼吸内科, 北京 100088;
2. 中国人民解放军第二炮兵总医院检验科, 北京 100088 |
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| 摘 要： | 利用氯霉素乙酰基转移酶(CAT)N端融合了可溶性蛋白细胞所表现出的氯霉素抗性高于不溶性蛋白这一特点,建立了一种能在大肠杆菌中方便地检测到目的蛋白可溶性的报告系统。以pMalp2X高效表达载体为基础,采用PCR法扩增CAT基因,并通过引物向CAT中引入所需的多克隆位点、终止密码子及linker,将扩增得到的CAT片段插入到pMalp2X中,构建pCAR报道质粒并作测序鉴定;PCR分别扩增IGF1、IL3、Trx基因,连接到pCAR载体上,导入大肠杆菌原核表达系统中进行诱导表达,SDSPAGE分析、氯霉素抗性试验对表达目的蛋白的可溶性和表现出的氯霉素抗性的相关性加以验证。结果显示用该载体表达的重组蛋白的可溶性与氯霉素抗性具有很强的相关性。本报告系统能通过直观的平板氯霉素抗性高低正确指示位于CATN端的目的蛋白的可溶性,为其在生物工程和蛋白质构象相关疾病研究等领域的应用打下了基础。
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| 关 键 词： | 蛋白质折叠 可溶性 原核表达 报告系统 氯霉素乙酰基转移酶 |
| 收稿时间： | 2005-05-27 |
| 修稿时间： | 2005-07-25 |
Development and Identification of a Chloramphenicol Acetyltransferase (CAT)-fusion Protein Reporting System |
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| WANG Ai-e,ZHANG Sui-yang,DONG Shu-kui,MEI Kai-cheng,MA Jian-xin,WANG Dong-xia,WANG Ying.Development and Identification of a Chloramphenicol Acetyltransferase (CAT)-fusion Protein Reporting System[J].China Biotechnology,2005,25(11):36-41. |
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| Authors: | WANG Ai-e ZHANG Sui-yang DONG Shu-kui MEI Kai-cheng MA Jian-xin WANG Dong-xia WANG Ying |
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| Institution: | 1 .Department of Respiratory, General Hospital of the Secondary Artillery, PLA Beijing 100088, China;2 .Department of Clinical Laboratory, General Hospital of the Secondary Artillery, PLA Beijing 100088, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Chloramphenicol acetyltransferase Protein folding Solubility Prokaryotic expression Reporting system |
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