| 芽孢杆菌β-折叠桶植酸酶的原核可溶性表达优化及包涵体复性研究 |
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| 引用本文： | 李倩倩,李中媛,冯舵,黄火清,韩翠晓,杨培龙,姚斌,高伟.芽孢杆菌β-折叠桶植酸酶的原核可溶性表达优化及包涵体复性研究[J].中国生物工程杂志,2012,32(8):49-55. |
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| 作者姓名： | 李倩倩 李中媛 冯舵 黄火清 韩翠晓 杨培龙 姚斌 高伟 |
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| 作者单位： | 1. 北京林业大学理学院/林木育种国家工程实验室 北京 100083;2. 中国农业科学院饲料研究所农业部饲料生物技术重点实验室 北京 100081 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金(30970578 31070651);教育部新世纪优秀人才支持计划(NECT-08-0731)资助项目 |
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| 摘 要： | 目的:来源于芽孢杆菌的β-折叠桶植酸酶基因PhyH,截去N端120个碱基编码的40个氨基酸后,成功构建了原核表达体系,通过两种方法分别得到有活性的目的蛋白PhyHT,并通过进一步纯化提高目的蛋白的纯度.方法:通过分子伴侣共表达系统提高目的蛋白的可溶性表达,并通过包涵体复性研究,从包涵体中制备出有活性的目的蛋白.结果:(1)目的蛋白PhyHT主要以包涵体形式存在于沉淀中；(2)通过优化表达条件,降低温度和诱导剂浓度均不能明显改善包涵体问题,通过构建分子伴侣共表达系统(即pG-KJE8、pGro7、pKJE7和pTfl6 4种分子伴侣质粒分别与重组表达质粒pET28b-PhyHT共表达),筛选能提高目的蛋白可溶性表达的分子伴侣质粒；(3)包涵体经过复性和进一步的纯化,得到了高纯度的有生物活性的目的蛋白.
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| 关 键 词： | β-折叠桶植酸酶PhyHT 分子伴侣 可溶性表达 包涵体 蛋白纯化 |
| 收稿时间： | 2012-04-27 |
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