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表达全人源抗人IgE单抗的细胞株构建及筛选
引用本文:张银川,刘萌萌,张雅婷,桂芳,张爱华,闭兰,潘勇兵.表达全人源抗人IgE单抗的细胞株构建及筛选[J].中国生物工程杂志,2015,35(3):66-74.
作者姓名:张银川  刘萌萌  张雅婷  桂芳  张爱华  闭兰  潘勇兵
作者单位:1. 武汉生物制品研究所有限责任公司抗体研究室 武汉 430207; 2. 中国生物技术股份有限公司科研与国际合作部 北京 100029
基金项目:国家科技重大专项资助项目(2011ZX09506-005)
摘    要:目的:构建及筛选高效表达原创性全人源抗人Ig E单克隆抗体的重组工程细胞株。方法:将采用核糖体展示技术筛选到的原创性全人源抗人Ig E单链抗体(sc Fv)基因改构设计为Ig G1κ型全长抗体,构建重组真核表达质粒并电转染CHO-S细胞,Dot-blot法选取多株高表达克隆进行40ml摇瓶批次培养,再据细胞生长特征及抗体表达量选取高表达克隆进行40ml摇瓶及3L摇瓶流加培养研究,选取候选细胞株并对改构前后抗体的生物学活性进行比较研究。结果:成功构建了p MH3-H、p MH3-L、p CApuro-H、p CApuro-L四种重组真核表达质粒并成功共转染CHO-S细胞。完成了4次电转染8轮细胞克隆筛选,获得两株表达量较高的候选克隆Mab1#和Mab2#,在3L摇瓶流加培养中抗体表达量分别达到470mg/L及499mg/L。生物膜光干涉技术(Bio-Layer Interferometry,BLI)亲和力结果显示Mab1#及Mab2#两株单抗亲和力均达到nmol/L级(10-9),与现有唯一上市的抗人Ig E单抗药物奥马珠单抗(Omalizumab)的亲和力相当。选取Mab1#全长抗体与其改构前的母本单链抗体的表面等离子共振技术(surface plasmon resonance,SPR)中和活性比较结果显示Mab1#抑制h Ig E与FcεRI结合的EC50为3nmol/L,EC90为9nmol/L,较改造前亲和力提高了4.3倍,中和活性(EC50)提高了23.7倍,中和活性(EC90)提高了41.3倍。结论:成功将表达原创性全人源抗人Ig E的单链抗体(约25k Da)改造为亲和力及中和活性均大幅提升的全长抗体(约150k Da),获得2个候选细胞株。

关 键 词:人免疫球蛋白E  全人源  单克隆抗体  细胞株  哮喘  
收稿时间:2015-01-12

Construction and Screening of Recombinant Cell Line Expressing Fully-human mAbs against Human IgE
ZHANG Yin-chuan;LIU Meng-meng;ZHANG Ya-ting;GUI Fang;ZHANG Ai-hua;BI Lan;PAN Yong-bing.Construction and Screening of Recombinant Cell Line Expressing Fully-human mAbs against Human IgE[J].China Biotechnology,2015,35(3):66-74.
Authors:ZHANG Yin-chuan;LIU Meng-meng;ZHANG Ya-ting;GUI Fang;ZHANG Ai-hua;BI Lan;PAN Yong-bing
Institution:ZHANG Yin-chuan;LIU Meng-meng;ZHANG Ya-ting;GUI Fang;ZHANG Ai-hua;BI Lan;PAN Yong-bing;Laboratory of Antibody Drugs,Wuhan Institute of Biological Products Co. ,Ltd.;Department of Research and International Cooperation,China National Biotec Group;
Abstract:
Keywords:Human IgE  Fully human  Monoclonal antibody  Cell line  Asthma  
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