| sTRAIL蛋白原核表达载体的构建、表达及抗肿瘤活性研究 |
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| 引用本文： | 王世奇,刘婧莹,刘晨浪,李纯,胡晓凤,夏立秋,张友明.sTRAIL蛋白原核表达载体的构建、表达及抗肿瘤活性研究[J].中国生物工程杂志,2015,35(12):1-7. |
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| 作者姓名： | 王世奇 刘婧莹 刘晨浪 李纯 胡晓凤 夏立秋 张友明 |
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| 作者单位： | 湖南师范大学生命科学学院 微生物分子生物学国家重点实验室培育基地 长沙 410081 |
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| 基金项目： | 国家国际合作项目(2011DFA32610)、国家"973"计划专项(2012CB722301)、国家"863"计划(2011AA10A203)、湖南省协同创新中心项目(20134486)资助项目 |
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| 摘 要： | 目的:从HL-60细胞中获得了sTrail基因片段,优化蛋白表达条件,并研究其抗肿瘤活性。方法:培养HL-60细胞,提取总RNA,通过RT-PCR扩增sTRAIL蛋白基因片段,并将目的基因克隆至原核表达载体p ET28a上,并电击转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达,优化蛋白表达条件,Ni-IDA柱纯化重组蛋白,SDS-PAGE蛋白电泳,胶内酶解质谱鉴定。纯化后的重组蛋白作用HUVEC,He La,Hep-3B,HCT-116,MDA-MB-231,H460细胞检测蛋白生物学作用。结果:DNA测序结果证实成功构建了重组质粒p ET28a-sTrail,SDS-PAGE蛋白电泳,胶内酶解质谱检测显示成功表达sTRAIL蛋白,MTT法和流式细胞术结果显示,sTRAIL蛋白对肿瘤细胞包括He La,HCT-116,MDA-MB-231,H460,Hep-3B细胞有良好的生物活性,对正常的HUVEC细胞无毒性。结论:成功构建可以高效表达sTRAIL蛋白的原核表达载体,优化蛋白的表达和纯化后所得sTRAIL蛋白具有良好的抗肿瘤生物活性,为研究和发展利用sTRAIL蛋白作为临床治疗抗肿瘤药物提供了重要基础。
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| 关 键 词： | 基因克隆 蛋白纯化 肿瘤坏死因子相关凋亡配体 原核表达 抗肿瘤活性 |
| 收稿时间： | 2015-04-15 |
Construction and Expression of Prokaryotic Expression Vector of Soluble TNF-related Apoptosis Inducing Ligand and Its Anti-tumor Activity |
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| WANG Shi-qi,LIU Jing-ying,LIU Cheng-lang,LI Chun,HU Xiao-feng,XIA Li-qiu,ZHANG You-ming.Construction and Expression of Prokaryotic Expression Vector of Soluble TNF-related Apoptosis Inducing Ligand and Its Anti-tumor Activity[J].China Biotechnology,2015,35(12):1-7. |
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| Authors: | WANG Shi-qi LIU Jing-ying LIU Cheng-lang LI Chun HU Xiao-feng XIA Li-qiu ZHANG You-ming |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | TNF-related apoptosis inducing ligand Prokaryotic expression Protein purification Antineoplastic activity Gene cloning |
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