| 毕赤酵母STE13基因敲除对GGH表达及其生物活性的影响 |
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| 引用本文： | 路庆鹏,许正宏,史劲松,窦文芳.毕赤酵母STE13基因敲除对GGH表达及其生物活性的影响[J].中国生物工程杂志,2013,33(4):28-33. |
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| 作者姓名： | 路庆鹏 许正宏 史劲松 窦文芳 |
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| 作者单位： | 江南大学药学院制药工程实验室 无锡 214122 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金，江苏省科技支撑计划 |
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| 摘 要： | 目的:重组毕赤酵母GS115/pPIC9K-GGH表达的人胰高血糖素样肽-1-人血清白蛋白融合蛋白(GLP-1 A2G)2-HSA,GGH]的细胞活性测评结果显示生物活性较低,这可能与其表达过程中蛋白降解有一定关联.通过对毕赤酵母GS115 STE13基因的敲除,获得一株完整表达蛋白GGH的毕赤酵母宿主,并进一步提高其表达产物GGH的生物活性.方法:采用基于PCR技术介导的Cre-Loxp系统重组技术成功敲除宿主菌GS115的STE13基因,得到一株STE13缺陷型菌株GS115/D13,并通过细胞活性测评系统检测GS115/D13表达产物GGH的生物活性.结果:通过对STE13基因缺陷型菌株GS115/D13与出发菌株GS115/W发酵表达对比,显示GS115/D13菌株表达融合蛋白GGH生物活性有明显提升,且表达量提高了25.8％,两菌株生长无明显差异.结论:STE13基因的敲除成功缓解了GGH表达过程中的降解问题,并相对出发菌株GS115/W大幅度提高了蛋白生物活性.
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| 关 键 词： | 毕赤酵母 GLP-1 STE13 生物活性 |
| 收稿时间： | 2013-01-14 |
The Disruption of STE13 Gene in Pichia pastoris Improves the Expression and Bioactivity of GGH |
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| LU Qing-peng,XU Zhen-hong,SI Jin-song,DOU Wen-fang.The Disruption of STE13 Gene in Pichia pastoris Improves the Expression and Bioactivity of GGH[J].China Biotechnology,2013,33(4):28-33. |
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| Authors: | LU Qing-peng XU Zhen-hong SI Jin-song DOU Wen-fang |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Pichia pastoris GLP-1 STE13 Bioactivity |
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