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栖热菌噬菌体TSP4 dCTP脱氨酶基因的克隆表达
引用本文:高婷婷,张琦,魏云林,季秀玲,林连兵.栖热菌噬菌体TSP4 dCTP脱氨酶基因的克隆表达[J].中国生物工程杂志,2013,33(4):34-39.
作者姓名:高婷婷  张琦  魏云林  季秀玲  林连兵
作者单位:昆明理工大学生命科学与工程学院 昆明 650500
基金项目:国家自然科学基金资助项目
摘    要:将编码栖热菌噬菌体TSP4菌株的dCTP脱氨酶tspdCD基因亚克隆到表达载体pET-32a中,并将重组质粒pET-32a-tspdCD转化至大肠杆菌Rosetta(DE3)中进行诱导表达.SDS-PAGE分析结果显示,目的蛋白经IPTG诱导后在大肠杆菌Rosetta(DE3)中以可溶性形式高效表达.通过Ni-NTA agarose亲和层析柱纯化表达的tspdCD,并对其活性,最适作用温度、pH、底物特异性以及金属离子和有机溶剂对其活性的影响进行测定,检测结果表明重组蛋白活性达到4.12U/mg,它的最适作用温度和pH分别为60℃和7.5,最佳反应底物是dCTP,2mmol/L的Ca2+和Mg2+对其活性具有明显的促进作用,而同浓度的Ni2+和Cu2+对其活性产生了明显的抑制作用,10% (V/V)的乙酸乙酯和异丙醇对其活性有很明显的促进作用,而同体积比的丙酮对其活性产生明显的抑制作用.实现了tspdCD在大肠杆菌系统中的功能性表达,为进一步研究高温噬菌体tspdCD的功能奠定了基础.

关 键 词:栖热菌噬菌体  tspdCD  克隆表达  亲和纯化  
收稿时间:2012-12-17

Cloning and Expression of the dCTP Deaminase Gene from Thermus Phage TSP4
GAO Ting-ting,ZHANG Qi,WEI Yun-lin,JI Xiu-ling,LIN Lian-bing.Cloning and Expression of the dCTP Deaminase Gene from Thermus Phage TSP4[J].China Biotechnology,2013,33(4):34-39.
Authors:GAO Ting-ting  ZHANG Qi  WEI Yun-lin  JI Xiu-ling  LIN Lian-bing
Abstract:
Keywords:Thermus phage  tspdCD  Cloning and expression  Affinity purification  
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